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背景和目的:乙型肝炎病毒是导致慢性肝炎、肝硬化、肝衰竭以及肝癌的重要原因,但是目前以核苷类药物和干扰素为基础的药物治疗绝大多数情况下不能彻底清除乙肝病毒.HBVRNaseH抑制剂是有希望用于抗乙肝病毒治疗的一类化合物.HBV至少有8个基因型,这些基因变异有可能导致病毒对HBV RNaseH抑制剂敏感性的不同.本研究目的即观察HBV的基因型变异对HBV RNaseH抑制剂敏感性的影响.方法:通过基因重组合成构建载体,大肠杆菌培养表达、镍亲和层析法蛋白纯化和Western blot鉴定等方法共获得18个病人源性基因B、C、D型HBV RNaseH,每个基因型包含6个不同的基因亚型,以尽可能使其具有代表性.通过寡核苷酸引导的RNA切割法分别检测了不同基因型/亚型HBV RNaesH的基础活性以及对3种不同HBV RNaseH抑制剂的敏感性.结果:18种基因亚型的HBV RNaseH基础活性具有显著性差异,最大活性差异大10倍;但是各基因亚型对不同HBV RNaseH抑制剂的敏感性无显著性差异.结论:不同基因序列的HBV RNaseH均可用于HBV RNaseH抑制剂的化合物筛选;HBV RNaseH抑制剂对于HBV具有良好的基因型覆盖性.