5-脂氧化酶基因真核表达载体的构建与鉴定

来源 :第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会) | 被引量 : 0次 | 上传用户:a13692624
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  目的 克隆人5-脂氧化酶(5-LO)基因,以构建真核表达载体,并通过检测其在293T细胞中的表达情况,为构建5-LO过表达转基因小鼠模型的建立提供5-LO基因表达载体。方法 从人全血标本中提取细胞总RNA,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,用带EcoRI酶切位点的特异引物扩增5-LO基因,分别构建5-LO目的基因的克隆载体与表达载体,提取质粒,经酶切,PCR和DNA测序鉴定;重组的融合表达载体pEGFP-5-LO通过脂质体转染的方法 ,瞬时转染293T细胞,倒置荧光显微镜观察pEGFP-5-LO的转染情况,并通过RT-PCR和Western blot检测5-LO在293T细胞中瞬时表达情况。
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