间接接触共培养下骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞及相关调控基因的时序表达

来源 :第一届全国中西医结合心血管病中青年医师论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kekexiaozi
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目的:应用新生大鼠心肌细胞(cardiomyocytes,CMs)与骨髓间充质干细胞(mesenclaymalstem cells,MScs)体外间接接触共培养的方法模拟心肌内环境,研究模拟环境下MSCs向CMs的分化情况及相关调控基因的时序表达,筛选MSCs定向分化为心肌细胞的重要调控基因。 方法:MSCs及CMs按1:5的比例进行体外间接接触共培养,连续观察两周,相差显微镜下观察MSCs形态变化,荧光免疫组化方法鉴定心肌特征性肌动蛋白α(α-actin)和肌钙蛋白(cTnT)的表达,应用半定量RT-PCR分析TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2c、TEF-1等相关调控基因在分化过程中的时序表达。 结果:共培养前MSCs呈成纤维细胞样,共培养后细胞形态发生变化,细胞体积增大,梭形形态逐渐变短变粗,近似棒状或椭圆形,细胞之间形成连接,排列方向趋于一致。α-actin及cTnT共培养前无表达,共培养后两周时阳性细胞比例分别为29.63%和27.38%。TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4和MEF-2C基因在共培养后一天表达开始增强,诱导后七天达高峰,以后虽有所下降但仍维持在较高水平;TEF-1基因在诱导过程中表达无明显变化。 结论:间接接触共培养条件下MSCs可分化为心肌样细胞;且在此过程中,TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4和MEF-2C基因可能是调控MSCs定向分化为心肌样细胞的重要调控基因。
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