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研究目的:KISS-1/GPR54被认为是青春期启动的"开关",其中Kisspeptin调节生殖轴并作为青春期开始的分子开关。Kisspeptin主要由下丘脑神经元分泌,并通过刺激Gn RH神经元上的同源受体GPR54起作用,然后激活调节青春期开始和生殖功能的下游基因。多年来关于KISS-1/GPR54研究的主要热点都在HPG轴上游的定位和功能,目前已经明确KISS-1/GPR54在多种组织中表达,特别是在胰腺和性腺中表达水平较高。当前相关研究已经发现KISS-1/GPR54在不同物种的睾丸中有表达,但不同的研究对于KISS-1/GPR54在睾丸中的表达定位暂无一致结论,故暂无法推测KISS-1/GPR54在睾丸中的功能。由于在生长期过程中,大鼠睾丸结构和功能迅速成熟,故本研究采取多次取点的方式研究生长期过程中大鼠睾丸中KISS-1/GPR54表达的变化情况及运动对KISS-1/GPR54表达,为进一步探究KISS-1/GPR54在睾丸中的生理功能奠定基础。研究方法:购自北京北京维通利华实验动物有限公司(许可证编号:SCXK(京)2012-0001)的SPF级3周龄(21D)离乳大鼠共64只,分为C组(32只)和CE组(32只),经北京体育大学动物福利伦理委员会批准(批准号:2016021A),动物分笼饲养,室温20-24℃,相对湿度40-60%,每日12小时光照/12小时熄灯,大鼠自由饮水、饮食。饲料采用高脂对照饲料喂养,饲料为购自华阜康公司的高脂对照饲料(货号:D12451B)。其中CE组进行每周5天,每次一小时的60-70%v VO2max强度的运动干预。根据前期实验结果和相关文献,确定21D、35D、43D、56D为四个取材时间点。大鼠称重后,2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,剂量为0.25ml/100g体重。待麻醉后,分别取两侧睾丸,剥离睾周脂肪及附睾后称重,并将一侧睾丸置于4%多聚甲醛中固定待用;另一侧睾丸于冰上剪碎,迅速用编好号的锡箔纸分包成两份,置于液氮中,后转移至-80°超低温冰箱中待用。采用免疫组化法确定KISS-1/GPR54定位、RT-qPCR法测定KISS-1/GPR54基因表达水平、Western Blot测定KISS-1/GPR54蛋白表达,采用SPSS20.0进行统计分析,数据采用M±SD进行表示。所有数据在进行分析前经正态性检验和方差齐性检验,符合标准后,采用重复测量方差分析对结果进行统计分析,取P<0.05为具有统计学意义显著差异,P<0.01为具有统计学意义非常显著差异。研究结果:1)在21D、35D、43D、56D四个时间点,KISS-1/GPR54在大鼠睾丸组织生精细胞和间质细胞中均见表达,运动干预对KISS-1/GPR54在睾丸中定位无影响。2)运动干预不改变生长期大鼠睾丸组织KISS-1/GPR54的m RNA表达趋势,但会下调KISS-1/GPR54的基因表达水平(P<0.05)。3)运动干预后,CE组大鼠睾丸组织KISS-1蛋白表达水平趋势与C组相同,但各时间点的蛋白表达水平均显著性低于C组(P<0.01);CE组大鼠睾丸组织GPR54蛋白表达水平从21D-43D与C组表达趋势相同即从21D-35D基本保持不变,在35D-43D阶段显著增加,但CE组GPR54蛋白表达水平在43D-56D阶段下降,在56D时CE组的GPR54蛋白表达水平显著性低于C组(P<0.01)。研究结论:生长期的不同阶段,KISS-1/GPR54在大鼠睾丸组织生精细胞和间质细胞中均见表达,运动干预对KISS-1/GPR54在睾丸中定位无影响;运动干预会显著下调KISS-1/GPR54在睾丸的基因表达水平;运动干预下调KISS-1在睾丸中的蛋白表达水平,改变GPR54在睾丸中的表达趋势。