【摘 要】
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精原干细胞是位于睾丸曲绌精管生精上皮内的生精干细胞,是一类定向干细胞.因此,分离培养精原干细胞将有助于人们深入了解精子发生的过程,也为转基因动物的制作提供了一种
【机 构】
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广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁,530005
【出 处】
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中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会
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精原干细胞是位于睾丸曲绌精管生精上皮内的生精干细胞,是一类定向干细胞.因此,分离培养精原干细胞将有助于人们深入了解精子发生的过程,也为转基因动物的制作提供了一种新的途径.本研究以3～5月龄本地水牛睾丸为材料,采用胶原酶、胰蛋白酶两步酶消化,平均每克睾丸实质可获得3.06× 106个细胞,细胞活率为90.12％.细胞接种于明胶锚被的平皿中培养24h,已贴壁生长的细胞经HE染色和波形蛋白免疫组化染色鉴定为支持细胞.收集未贴壁细胞进行Percoll不连续密度梯度离心,27％～35％的Percoll条带中主要为精原细胞,纯度为63.25％.将纯化的精原细胞接种于支持细胞饲养层上培养,6～7天细胞开始增殖,15天左右形成小集落.经碱性磷酸酶(AP)和免疫组化染色鉴定,水牛精原细胞集落呈AP染色阳性,表达Oct-4和c-kit表面抗原.以上结果表明,通过差异粘附法和Percoll不连续密度梯度离心法可分别获得纯度较高的水牛支持细胞和精原细胞.
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