【摘 要】
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目的:建立一种能同时检测双歧杆菌和芽孢杆菌的双重荧光定量PCR方法.方法:通过对双歧杆菌和芽孢杆菌的引物、探针的浓度、Mg2+浓度、Taq酶的用量、反应条件等进行优化,并作了特异性、敏感性和重复性实验,建立了可同时检测临床标本中双歧杆菌和芽孢杆菌的双重荧光定量PCR方法.结果:该方法在两菌DNA含量为108～104copies有较好的线性关系;检测两菌标准品DNA模板最少检测到的细菌数分别为9 C
【机 构】
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四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心,四川 雅安,625014 四川农业大学动物医学院禽病防治研
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛
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目的:建立一种能同时检测双歧杆菌和芽孢杆菌的双重荧光定量PCR方法.
方法:通过对双歧杆菌和芽孢杆菌的引物、探针的浓度、Mg2+浓度、Taq酶的用量、反应条件等进行优化,并作了特异性、敏感性和重复性实验,建立了可同时检测临床标本中双歧杆菌和芽孢杆菌的双重荧光定量PCR方法.
结果:该方法在两菌DNA含量为108～104copies有较好的线性关系;检测两菌标准品DNA模板最少检测到的细菌数分别为9 CFU/mL和6 CFU/mL;特异性试验表明该检测方法只对双歧杆菌和芽孢杆菌基因组呈阳性反应.分别用该技术和单重荧光定量PCR检测25份来自雏鸭的十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠,结果显示两种方法对样品的检测符合率100％.
结论:本研究建立的双重荧光定量PCR方法可同时定量检测临床标本中双歧杆菌和芽孢杆菌,该法比单重荧光定量PCR更方便、快速准确.
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