【摘 要】
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自2006年爆发高致病性猪繁殖与呼吸综合征(Highly Pathogenic-Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,HP-PRRS)至今,其病原HP-PRRSV一直处于不断的变异及进化过程中
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所,中国上海,200241
【出 处】
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第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医
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自2006年爆发高致病性猪繁殖与呼吸综合征(Highly Pathogenic-Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,HP-PRRS)至今,其病原HP-PRRSV一直处于不断的变异及进化过程中.为了深入了解HP-PRRSV的生物学特性、致病机理、毒力决定因子以及其不断变异的分子机制,最有效的方法之一就是利用反向遗传操作系统对其进行分析.PRRSV的基因组中除ORF1和ORF2以及ORF4和ORF5外,其结构蛋白编码框架之间有少则几个多则逾百的碱基重叠(overlap),相关研究表明:ORF重叠区的影响会导致嵌合病毒失去感染性,因此可选择非重叠区或者将重叠区拉开作为外源基因的插入位点.另外,需要注意的是外源基因的插入原则应以能在最小程度上改变病毒基因组为基础.这对于下游的研究工作至关重要.增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)作为一个报告基因插入病毒的基因组中已被广泛应用于很多病毒的研究中.本研究在高致病性PRRS毒株HuN4的细胞致弱毒株感染性克隆HuN4-F112的基础上,运用反向遗传操作技术,在其基因组ORFlb和ORF2之间插入EGFP,并在外源基因3’端下游插入此病毒的转录调控序列6(TRS6),由其引导病毒基因组ORF2的转录,由此构建成PRRSV-EGFP嵌合全长感染性克隆(pH112-EGFP).对拯救出的EGFP重组PRRSV(vH112-EGFP)与亲本病毒(vH112)在病毒生物学特性等方面进行比较分析,所获得的嵌合病毒为今后的研究提供了重要工具.
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