Tn10介导的枯草芽孢杆菌YB-81转座突变体系的建立及突变体筛选

来源 :中国植物保护学会成立50周年庆祝大会暨2012年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lilei1984lilei
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  生防枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)YB-81,对全蚀病等小麦根部病害具有很好的防治效果,本文以YB-81为研究对象,利用含Tn10转座子的PIC333质粒电转化的方法,实现了Tn10介导的枯草芽孢杆菌YB-81的转化,并研究了抗生素(红霉素、壮观霉素)和电转化强度对转化效率的影响.结果表明:在采用28℃、新鲜制备的感受态,设电转化强度为1 kV/5s、1.2 kV/5s、1.4 kV/5s、1.6 kV/5s、1.8 kV/5s、2.0 kV/5s、2.4 kV/5s时,以2 kV/5s的强度为最佳,可得到转化子;在采用28℃、新鲜制备的感受态、设电转化强度为2 kV/5s,红霉素筛选浓度分别设为0μg/ml、0.2μg/ml、0.4μg/ml、0.6 μg/ml、0.8μg/ml、1.0μg/ml时,以0.8μg/ml浓度为最佳,可抑制野生菌株生长,并能筛选到转化子,高温诱导后可抑制菌株生长,筛选到突变子;壮观霉素浓度分别设为0μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150 μg/ml、200 μg/ml、250 μg/ml、300 μg/ml、350 μg/ml时,以300μg/ml浓度为最佳,高温诱导后可筛选到突变子.进一步通过PCR和Southern验证了转座子插入到了突变株基因组DNA中.通过以上最佳条件摸索,降低了假阳性提高了转化效率,已建立了9 600株的突变体库,后期筛选抗病相关基因的研究工作正在进行.本文结果为进一步研究生防枯草芽孢杆菌YB-81的生长发育、生防机理和与植物根系互作抑制病原菌的蔓延等相关功能研究奠定了基础.
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