【摘 要】
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目的：探讨蛋白激酶Ca(PKCa)对小鼠胚胎干细胞(ES细胞)定向诱导分化中发育基因(pax-6,slit-2,netrin-1)表达的影响。
方法：ES-BALB／c细胞株用无mLIF的ES细胞培养液培养4d,形
【机 构】
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中山大学中山眼科中心,广东510060
【出 处】
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2003年中国博士后生命科学学术研讨会暨院士论坛
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目的：探讨蛋白激酶Ca(PKCa)对小鼠胚胎干细胞(ES细胞)定向诱导分化中发育基因(pax-6,slit-2,netrin-1)表达的影响。
方法：ES-BALB／c细胞株用无mLIF的ES细胞培养液培养4d,形成胚胎体,再分别种植于预置有盖玻片的6孔板和直径为100mm的培养皿,经5×10-7mol／L视黄酸(RA)诱导后,用nestin和NF-200来鉴定分化细胞的类型,在诱导后第1,3,5,7和14d用逆转录聚合酶链(RT-PCR)方法测定细胞的PKC,PKCa和发育基因的mRNA表达情况,并观察了PKC激活剂佛波酯(PMA)和PKC抑制剂D-鞘氨醇对它们表达的影响。
结果：免疫组化发现在诱导后第3d大多数细胞Destin和NF-200染色阳性。RT-PCR证实诱导后第1dPKCa,pax6和netrin-1的mRNA表达急剧下降,第3～7d逐渐升高,至第14d恢复至正常水平,而slit-2在诱导前后均无明显表达。PMA可使PKCa、pax-6和netrin-1的mRNA在诱导后细胞中的表达增强,而D-鞘氨醇的作用相反,使它们的表达明显降低,而对slit-2无明显影响。
结论：发育基因pax-6和netrin-1在ES细胞定向分化为神经样细胞中有重要的调控作用,可能是通过PKC。信号通路起作用,其机制还有待于进一步研究。
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