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目的：吗啡在人体内代谢后尿中主要以3-β-D-葡萄糖醛酸吗啡(M3G)和6-β-D-葡萄糖醛酸吗啡(M6G)排泄,其中所占比例最高的排泄产物为M3G.WADA明确规定在尿中的总吗啡含量的阈值为1mg/L.反兴奋剂检测工作的吗啡检测需要定量检出尿中包括游离吗啡和M3G、M6G的总浓度.目前我实验室主要采用酸水解、液液萃取及气相色谱/质谱联用技术进行定量工作,存在前处理步骤繁琐,分析时间较长,结果重现性较差,不确定度较高等问题.液相色谱-质谱/质谱联用技术与气质方法相比,大大提高了检测的灵敏度和选择性.但针对吗啡现有方法不适用于本实验室.因而亟待建立操作简单,数据可靠性高的的吗啡定量方法.方法：尿样加内标后,加入磷酸盐缓冲液及β-Glucuranidase水解过夜,加入固体缓冲剂(NaHCO3/K2CO3=3/2,w/w)和提取液(乙醚/异丙醇=9/1,v/v)萃取,有机相吹干后初始流动相定容进样于LC/MS/MS.采用EclipseXDB-CN,5μm×2.1mm×150mm柱;柱温40℃;pH3.5的甲酸胺缓冲液和乙腈进行梯度洗脱;流速0.3mL/min.采用多反应离子监测正离子模式结果：3.1水解方法的选择通过比较控制尿样酸水解和酶水解不同时间及直接萃取的测定结果,选用了酶水解过夜的方法对尿样进行前处理.3.2方法验证morphine定量限为0.05mg/L定量限(信噪比大于10:1);配制系列浓度的M3G控制尿样,回归分析确定线形范围为0.05-10mg/L.测定morphine浓度为1mg/L的M3G控制尿样,偏差小于5％(n=10);同人,同设备,日内精密度为2.67％;使用不同人不同设备,日间精密度为1.66％(n=3);提取回收率为85.50±0.040％(n=5);反复冻融三次,尿样于4℃保存30天,实际测量值相对偏差分别为-2.75％和2.33％.结论：本研究建立了液相色谱-串联质谱测定morphine的定量方法并进行了方法验证.既保证了结合型水解的完全,又保证了不影响游离型测定的准确,实现了一个步骤同时测定尿中morphine总量.目前已应用于我实验室常规检测和WADA的外部质量评估考试,操作简单易行,数据准确可靠,满足WADA实验室国际标准技术文件的要求,效果良好.