【摘 要】
：
利用PCR(PolymeraseChainReaction)技术扩增出IBDV的结构蛋白基因VP3,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置
【机 构】
：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江,哈尔滨,150001
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会
论文部分内容阅读
利用PCR(PolymeraseChainReaction)技术扩增出IBDV的结构蛋白基因VP3,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确.SDS-PAGE检测表明,经重组质粒VP3/PA转化、诱导的受体菌E.coliDH5α能表达结构蛋白基因VP3,约33ku,表达量达到了菌体总蛋白的33.9％,经Westernblot等检测表明,诱导表达的抗原蛋白能与vvIBDV阳性血清发生特异性反应.这为IBDV血清学诊断方法的建立打下了基础。
其他文献
基于目前已知禽流感病毒基质蛋白、血凝素、神经氨酸酶基因,研究建立了A型、H5、N1、H9、N2亚型特异性RT-PCR及H5/N1、H9/N2、A/H5/N1多重RT-PCR检测技术,用于检测或同时检测
建立简便的一步法RT-PCR检测方法,对禽流感病毒(AIV)的血凝素(HA)分型进行了研究.参照AIV的HA基因序列设计了1对引物,对H9和H5亚型AIV的扩增产物大小分别为579bp和177bp,很容
将H5N1亚型禽流感病毒NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移载体pFastBac1-NS1.将pFastBac1-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1.
参考AIVM基因和HA基因序列,设计了四对引物,其中一对为针对不同HA亚型AIV的通用引物,另外为三对分别针对H5、H7和H9亚型AIV的特异性引物.这些引物所扩增的cDNA片段大小分别为
针对新城疫病毒(NDV)F基因保守区内的核苷酸序列设计1对引物,用此对引物和标准NDV毒株(含NDV强毒和弱毒)的RNA为模板,建立并优化SYBRGreenⅠ模式荧光RT-PCRNDV检测方法.待测
鹅源新城疫已经成为危害养鹅业的又一主要病毒性疾病.国内许多学者认为鹅源新城疫类似于鸡新城疫病毒,本试验通过对2株本病病原的初步生物学特性研究和分子流行病学分析,具体
以纯化的禽流感(AIV)核蛋白作为捕捉抗原,金标兔抗鸡抗体作为金标二抗,建立检测禽流感血清抗体的胶体金免疫层析试纸条(ICS).对标准阳性血清不同滴度进行检测,ICS试验的敏感
本研究用2个不同亚型的AIV感染Madin-Darbycaninekidney(MDCK)细胞,通过观察细胞病变、红细胞凝集实验、间接免疫荧光等探讨不同致病力禽流感病毒(AIV)在MDCK细胞上的生长特
目前对新城疫(Newcastledisease,ND)致病性的检测常用的方法为体外试验,需要测定三个致病指数,即最小致死量致死鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI),6周
利用RT-PCR技术,对1998～2002年间洛阳地区的新城疫典型发病禽群中所分离到的15个地方毒株的F基因主要功能区片段进行了克隆和序列分析,并根据其47～435位核苷酸序列构建了系统进