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目的：对柔嫩艾美耳球虫(E. tenella)杨凌株RB1-a基因进行克隆与表达，检测表达产物的免疫保护性，为鸡球虫的基因工程疫苗的研制奠定基础。
方法：以纯化的E.tenella杨凌株孢子化卵囊的总RNA为模板，用RT-PCR方法扩增出其RB1-a基因，测序后进行序列分析。然后将RB1-a基因N端不含信号肽序列克隆到表达载体pET-32a(+)中，构建pET-32a-RB1-a重组质粒，并在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出重组蛋白，将重组蛋白纯化后免疫雏鸡，对其免疫效果进行评价。
结果：E.tenella RB1-a基因的开放阅读框(ORF)包含618个碱基，编码205个氨基酸，与报道的E.acervulina PAPa46株ORF序列相似性为99.84％，两者推导的氨基酸序列相同。SDS-PAGE分析表明，重组质粒表达产物为42 ku的融合蛋白。各种抗球虫指标的测定结果显示，RB1-a免疫组和RB1-a+佐剂免疫组的相对增重率分别为64.2％和69.4％，卵囊减少率达到37.22％和30.56％，ACI分别为146.2和1.50.4。
结论：RB1-a基因具有很强的保守性，种间差异不大；重组蛋白具有部分免疫保护效果，该研究为鸡球虫基因工程疫苗的研制奠定了基础。
方法：以纯化的E.tenella杨凌株孢子化卵囊的总RNA为模板，用RT-PCR方法扩增出其RB1-a基因，测序后进行序列分析。然后将RB1-a基因N端不含信号肽序列克隆到表达载体pET-32a(+)中，构建pET-32a-RB1-a重组质粒，并在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出重组蛋白，将重组蛋白纯化后免疫雏鸡，对其免疫效果进行评价。
结果：E.tenella RB1-a基因的开放阅读框(ORF)包含618个碱基，编码205个氨基酸，与报道的E.acervulina PAPa46株ORF序列相似性为99.84％，两者推导的氨基酸序列相同。SDS-PAGE分析表明，重组质粒表达产物为42 ku的融合蛋白。各种抗球虫指标的测定结果显示，RB1-a免疫组和RB1-a+佐剂免疫组的相对增重率分别为64.2％和69.4％，卵囊减少率达到37.22％和30.56％，ACI分别为146.2和1.50.4。
结论：RB1-a基因具有很强的保守性，种间差异不大；重组蛋白具有部分免疫保护效果，该研究为鸡球虫基因工程疫苗的研制奠定了基础。