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目的:研究蜈蚣提取物在体内、体外抗宫颈肿瘤的生物学活性,并探索其作用机制,为蜈蚣在宫颈癌的临床应用提供实验依据。方法 :以宜昌地区盛产的赤头金足多棘蜈蚣为材料,用乙醚和乙醇提取其有效成份,即蜈蚣提取物A和B进行如下实验研究:1)体外实验:蜈蚣提取物A或B分别处理人宫颈腺癌HeLa、鳞癌CaSki和SiHa三种细胞48小时,光镜观察细胞形态学改变、MTT法检测细胞增殖率、琼脂糖凝胶电泳分析片段化DNA检测细胞凋亡现象;流式细胞术检测细胞各周期DNA及亚G1凋亡峰含量,蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8)的表达以探索其作用机制。2)体内实验:制备荷宫颈鳞癌U14的BALB/c小鼠动物模型,蜈蚣提取物A或B分别经灌胃给药,监测荷瘤鼠体重、生存期、瘤重、抑瘤率以观察其体内抗肿瘤效应;光、电镜观察瘤组织形态学变化、免疫组化SP法检测凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Smac、Survivin)的表达、酶联免疫吸附试验测定瘤组织匀浆和血浆中血管内皮生长因子的含量,探索蜈蚣体内抗肿瘤作用机制;胸、脾指数、淋巴细胞亚群含量测定评价荷瘤鼠免疫功能与抗肿瘤活性相关性;肝、肾组织病理学切片观察本实验所选剂量范围内的药物副作用。结果 :1),蜈蚣提取物A或B体外分别处理三种人宫颈癌细胞后,形态学观察发现细胞数量减少、生长稀疏,部分细胞由多角形、梭形逐渐圆缩,甚至失去贴壁生长特性;MTT结果显示8~32mg/ml的CE和CA均以浓度依赖方式降低细胞吸光度值,对HeLa、CaSki、SiHa的IC50 CE依次为:16.4mg、22.8mg、16.8mg,CA依次为:18.9mg、29.8mg、22.1mg;流式细胞术分析可见药物处理组细胞各周期DNA含量发生改变并出现明显的亚G1凋亡峰,具有一定量效关系;琼脂糖凝胶电泳显示药物处理组细胞出现凋亡细胞特征性的DNA"阶梯"(DNA Ladder);Western Blot结果显示促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达阳性。2)蜈蚣提取物A或B分别处理荷瘤鼠,实验中无一死亡;,蜈蚣提取物A、B抑瘤率分别为52.85%、33.65%;光镜观察实体瘤组织发现生理盐水对照组可见瘤组织浸润横纹肌组织中生长旺盛,而药物处理组则普遍可见大量坏死和凋亡;电子透射显微镜观察超微结构,发现大量核固缩、边聚的凋亡肿瘤细胞;免疫组化结果显示,蜈蚣提取物A和B使Bax表达量明显增高,而抑凋亡蛋白Bcl-2和Survivin表达量降低,但另一促凋亡蛋白Smac的表达无显著差异;蜈蚣提取物A和B对VEGF的含量影响不大;胸腺指数和脾脏指数无显著改变;A组小鼠CD3~+的T细胞总数无明显改变,CD4~+/CD8~+比值、CD19~+的B细胞数下降;B组CD3~+以及CD4~+细胞下降显著;肝、肾组织切片发现蜈蚣提取物A和B在本文实验浓度范围内无明显毒副作用。结论 :1)两种蜈蚣提取物在体外均可有效抑制三种人宫颈癌细胞的生长,其抑制作用可以通过干扰DNA合成、阻断细胞分裂增殖实现。2)两种蜈蚣提取物在体内也能有效抑制宫颈肿瘤的生长。3)蜈蚣在体内、外均可诱导细胞捌亡,其机制可能与Bax和Caspase-3介导的线粒体途径有关。4)两种蜈蚣提取物比较研究中蜈蚣提取物B有一定的免疫抑制作用,蜈蚣提取物A对免疫功能无明显影响。作为传统中药的新用途扩展,提示蜈蚣提取物A更有望用于宫颈癌的临床治疗。