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RNA干扰(RNA interference,RNAi)是利用dsRNA诱导序列特异的转录后基因沉默,已成为基因功能研究的重要方法.目前橘小实蝇RNAi多用注射法和饲喂法,但是大量研究表明dsRNA介导的RNAi在双翅目昆虫中具有其沉默效率不高、持效差等多种问题.有研究表明核酸载体如脂质体等可有效保护核酸,并使核酸克服与细胞膜之间的静电斥力而进入细胞,从而提高RNAi效率.本研究以脂质体Lipofectamine 2000(invitrogen)、Viafect(Promega)为核酸载体,选取在橘小实蝇3个表达模式完全不同的基因,包括中肠高表达的羧酸酯酶基因CarE-6、组成性表达的肌动蛋白基因Actin-2以及在中枢神经系统高表达的神经肽基因Natalisin为对象,研究不同浓度及配比的脂质体对RNAi效率的影响.本研究中使用的dsRNA浓度均为4 000ng/L,dsRNA与脂质体的质量体积比分别设置为6：1、4：1、2：1,以1.5g/头的剂量注射橘小实蝇成虫.Actin-2、CarE-6对羽化第三天的成虫进行注射、而Natalisin则选择羽化第五天的成虫,通过前期实验,分别选择注射后72h、48h、24h的橘小实蝇提取RNA,反转录为cDNA,利用RT-qPCR技术检测沉默效率,并与单独注射dsRNA进行比较.结果表明对于羧酸酯酶基因CarE-6,与Lipofectamine 2000混合注射后,在4：1与2：1的比例下,沉默效率均比单独注射dsRNA高,但是在6：1条件下,反而降低；在与Viafect混合注射后,只在2：1的比例下其沉默效率提高.对于肌动蛋白基因Actin-2,与Lipofectamine 2000混合注射后,只在2：1的比例下其沉默效率提高；与Viafect混合注射后,在4：1与2：1的比例下,沉默效率均比单独注射dsRNA高.对于神经肽基因Natalisin,与Lipofectamine 2000混合注射后,在4：1与2：1的条件下,沉默效率均比单独注射高,但在6：1比例下沉默效率降低；在与Viafect混合注射后,只在2：1的比例下其沉默效率提高.因此对于一些难以干扰的基因,可用dsRNA与Lipofectamine 2000或Viafect以2：1的质量体积比混合,室温孵育20min后注射,提升其沉默效率.这为橘小实蝇通过注射法进行RNAi提升沉默效率提供了一定的借鉴,同时在今后的实验中也可以对比例进行更细致的优化,以得到更好的结果.