【摘 要】
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目的：应用基因工程技术,在昆虫细胞中表达汉坦病毒S基因,表达产物作为诊断抗原,用于检测血清中抗汉坦病毒特异性抗体IgG.方法：PCR扩增HV-Z10株NP编码基因,基因工程方法构建NP编码基因昆虫表达系统rBAC-Z10S-TN.间接荧光法了解rNP表达及与特异性免疫反应情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rNP.SDS-PAGE观察纯化情况,建立免疫印迹法检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清样品,
【机 构】
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310051杭州,浙江省疾病预防控制中心
【出 处】
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第八届传染病防控技术研究与应用技术论坛
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目的：应用基因工程技术,在昆虫细胞中表达汉坦病毒S基因,表达产物作为诊断抗原,用于检测血清中抗汉坦病毒特异性抗体IgG.
方法：PCR扩增HV-Z10株NP编码基因,基因工程方法构建NP编码基因昆虫表达系统rBAC-Z10S-TN.间接荧光法了解rNP表达及与特异性免疫反应情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rNP.SDS-PAGE观察纯化情况,建立免疫印迹法检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清样品,并与常规间接免疫荧光法进行比较.
结果：rBAC-Z10S-TN高效表达rNP,提纯rNP SDS-PAGE显示单一蛋白条带,此抗原仅与肾综合征出血热(HFRS)患者血清起反应,而与正常人及其它发热病人血清不起反应.经双盲试验,两法检测疑似肾综合征出血热患者血清43份,符合率为97.8％.
结论：成功构建了HV-Z10株NP编码基因高效真核表达系统.所建立的免疫印迹法检可作为HFRS简便、安全、敏感、特异的血清学诊断新方法.
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