【摘 要】
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利用PCR扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒的GP3与GP4基因,按正确的读码框与GP5基因单独或同时串联,成功构建穿梭载体pShuttle-CMV-GP3-GP5、pShuttle-CMV-GP4-GP5、pShuttle-CMV
【机 构】
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南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏南京,210095
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利用PCR扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒的GP3与GP4基因,按正确的读码框与GP5基因单独或同时串联,成功构建穿梭载体pShuttle-CMV-GP3-GP5、pShuttle-CMV-GP4-GP5、pShuttle-CMV-GP3-GP4-GP5.同时构建了单个基因的穿梭载体.PCR、测序鉴定正确.Pme Ⅰ线性化后在BJ5183大肠杆菌内与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组,产生重组腺病毒DNA.将重组腺病毒DNA经Pac Ⅰ线性化后脂质体法转染HEK-293A细胞,包装成完整的腺病毒.IFA和Western blot可以检测到GP3、GP4、GP5单个基因的重组腺病毒以及GP3与GP5、GP4与GP5、GP3、GP4与GP5串联的重组腺病毒构建成功,可以正确的表达目的蛋白.将构建好的重组腺病毒免疫小鼠,结果表明三种方式串联的重组腺病毒比单基因重组腺病毒可以诱导产生更强的体液免疫应答(ELISA抗体和中和抗体)和细胞免疫应答(淋巴细胞增殖和CTL反应).这说明三种方式串联的重组腺病毒具有更好的免疫原性,为下一步猪体免疫试验奠定了基础.
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