【摘 要】
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目的 构建内含癌胚抗原(CEA-cDNA)的PET30a-CEA的原核表达载体及其作为结大肠癌预防性疫苗的研究.方法 本研究将编码CEA蛋白的cDNA序列插入PET30a构建成PET30a-CEA的表达
【出 处】
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2014年肿瘤多学科综合诊治新进展学术研讨会
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目的 构建内含癌胚抗原(CEA-cDNA)的PET30a-CEA的原核表达载体及其作为结大肠癌预防性疫苗的研究.方法 本研究将编码CEA蛋白的cDNA序列插入PET30a构建成PET30a-CEA的表达载体.经过菌落PCR和双酶切鉴定,以及经测序鉴定正确然后转化大肠杆菌BL21(DE3)；以IPTG诱导表达CEA蛋白.通过SDS-PAGE电泳鉴定CEA蛋白的表达水平.重组蛋白经Ni2+亲和层析柱,离子交换法和凝胶分子筛纯化后,再经SDS-PAGE鉴定分子量和Western-blot验证CEA蛋白.将纯化后的CEA蛋白1μg作用6-8周C57BL/6健康小鼠腹腔巨噬细胞20小时后,取上清用ELISA法检测IL-2和IFN-γ分泌水平,并设立阴性对照组；另取20μg纯化的CEA蛋白,免疫6-8周C57BL/6健康小鼠和结直肠癌模型小鼠.三次免疫后取小鼠尾静脉血用ELISA法检测CEA抗体的产生和观察荷瘤小鼠的生存时间.结果 实验组IL-2和IFN-γ分泌水平明显增高,其差异有统计学意义(P＜0.05).我们还进一步证实了纯化后的CEA蛋白免疫C57BL/6小鼠后,可以诱导高滴度CEA抗体的产生,并对荷瘤小鼠具有明显的抗肿瘤作用.另外观察肿瘤组小鼠的生存时间发现,免疫组小鼠的生存时间明显延长.结论 PET30a-CEA大肠杆菌工程菌株能高效表达CEA蛋白,大量纯化的CEA蛋白为其进一步的研究与应用奠定了基础,CEA蛋白可以诱导抗原特异性体液免疫应答和细胞免疫应答,对荷瘤小鼠具有明显的抗肿瘤作用,能明显延长荷瘤小鼠的生存时间.
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