【摘 要】
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目的：研究六价铬暴露对核糖体DNA重复序列拷贝数的影响及可能的机制.方法：重铬酸钾处理人淋巴母细胞系24h,去除铬处理后将细胞在新鲜培养液中恢复培养一周,用实时定量PCR和数字PCR方法分别检测不同时间点rDNA(18S、5.8S、28S和5S)的拷贝数和rRNA表达,用激光共聚焦方法观察nucleolin表达变化,再用RNA二代测序分析全基因组基因表达变化.同时,我们用RNA多聚酶抑制剂、拓扑异
【机 构】
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浙江省医学科学院,职业病防治研究所
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目的：研究六价铬暴露对核糖体DNA重复序列拷贝数的影响及可能的机制.方法：重铬酸钾处理人淋巴母细胞系24h,去除铬处理后将细胞在新鲜培养液中恢复培养一周,用实时定量PCR和数字PCR方法分别检测不同时间点rDNA(18S、5.8S、28S和5S)的拷贝数和rRNA表达,用激光共聚焦方法观察nucleolin表达变化,再用RNA二代测序分析全基因组基因表达变化.同时,我们用RNA多聚酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和DNA甲基化转移酶抑制剂分别处理人淋巴细胞系,观察引起rDNA拷贝数变异的可能途径,再经细胞周期同步化处理后分析细胞周期与rDNA拷贝数变异的关系.最后,我们在六价铬暴露人群中检测rDNA拷贝数变异情况,分析其与六价铬暴露的关系.结果：我们发现六价铬处理后可致rDNA拷贝数变异迟发效应、但可恢复至正常水平,rRNA表达无明显变化,nucleolin出现数量和形态改变,RNA测序发现70个核糖体相关基因及40个核仁基因表达异常.抑制剂研究发现仅RNA poI抑制剂可诱发类似效应,经细胞周期同步化处理后,六价铬未能诱发rDNA拷贝数变异.人群研究发现六价铬暴露人群四个rDNA基因拷贝数均明显低于对照人群.结论：六价铬在人淋巴母细胞系中诱发的rDNA拷贝数变异具有延迟效应和可恢复性,细胞周期、nucleolin表达及RNA pol I可能与此有关.
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