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植物次生代谢物(Plant secondary metabolites)白藜芦醇(Resveratrol,Res)是一种植物保护素(Phytoalexin),对病原菌有防御作用.该化合物是一种抗氧化剂,具有抗癌、抗炎、预防心血管疾病等保健功能.但自然界中存在的Res量比较少,因此利用生物技术合成Res成为必然.白藜芦醇合酶(Resveratrol synthase,RS)是Res生物合成中的关键酶,负责催化1分子香豆酰辅酶A(coumaroyl-CoA)和3分子丙二酰辅酶A(malonyl-CoA)生成白藜芦醇.本研究根据已报道的基因序列设计特异引物,运用PCR、RT-PCR技术和SOE (Splicing by Overlap Extension)法从葡萄中克隆到白藜芦醇合酶基因全长DNA和三个同源基因cDNA序列,三个同源基因分别命名为vrs1、vrs2和vrs3.白藜芦醇合酶基因DNA序列全长1610bp,包含一个内含子；vrs1、vrs2和vrs3全长分别为1241bp、1182bp 1241bp,其中vrs,vrs3在5′端含有59bp的非编码区,vrs2在5′端不含非编码区,但三者都包含一个1179bp的开放阅读框,编码392个氨基酸.同源性分析表明,vrs1、vrs2、vrs3序列相似性最低为97.58％,其编码的氨基酸序列一致性最低为98.72％；分别将vrs1、vrs2、vrs3序列与香菇小片段gpd启动连接构建表达载体,三个重组质粒经过PCR鉴定,酶切鉴定,测序鉴定,分别命名为pgLes-vrs1、pgLes-vrs2,pgLes-vrs3；采用PEG介导法分别将表达载体pgLes-vrs1、pgLes-vrs2、pgLes-vrs3与辅助质粒pCe1001(含有trp1基因)共转化进色氨酸营养缺陷型的灰盖鬼伞粉孢子的原生质体中.经过选择培养基筛选,PCR和RT-PCR分子鉴定,分别获得了3株、8株和4株转化子.