微生物酶法合成左乙拉西坦手性中间体的研究

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左乙拉西坦是一种手性抗癫痫特效药物,因其显著的疗效、较高的安全性以及在新药研发方面的巨大潜在价值,而广受关注。在左乙拉西坦合成过中,(S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯是关键的手性中间体。本论文从土壤中筛选得到了一株对外消旋α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯具有较好立体选择性水解活性的菌株,经16SrDNA测序,初步鉴定为蜡状芽孢杆菌,并命名为蜡状芽孢杆菌WZZ001 (Bacillus cereus WZZ001),保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号为:CCTCCM 2012403 。通过脂肪酶盖子结构实验的验证,菌株B. cereus WZZ001所产的酯类水解酶为脂肪酶。本论文对菌株B. cereus WZZ001发酵产酶条件进行了初步优化,最适产酶培养基组成为:麦芽糖5g/L,蛋白胨5 g/L,酵母膏1 g/L,MgSO4 5mmol/L。将菌株B. cereus WZZ001接种于最适产酶培养基,在30 L通风式发酵罐中,30℃培养24 h。酶的活力达到163.59 U/L,生物量为7.29 g/L论文对菌株B. WZZ001静息细胞催化外消旋α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯的不对称水解反应进行了优化研究。确定了最优的酶转化条件:静息细胞添加量2%,底物浓度2%,反应温度37.5℃,pH7.8,反应时间13 h。在上述酶催化反应条件下,转化率54.04%,e.e.s值达到99.9%以上,对映选择率E为168.14。
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