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目的初步探讨卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)的中医体质类型分布特点。通过对POF小鼠调控卵泡募集的始基卵泡生长促进因子GDF-9(GDF-9/Smad2)、始基卵泡生长抑制因子AMH(AMH/ALK2/Smadl)信号转导的研究,探讨免疫性卵巢早衰的发病机制,并从该角度对左归丸治疗免疫性卵巢早衰的机理进行探讨。方法收集2011年12月至2012年12月在广州中医药大学第一附属医院妇科门诊就诊的22例符合POF诊断标准的患者,募集健康对照组22例。由受试者填写北京中医药大学王琦教授制定的《中医体质调查量表》,研究者根据王琦教授制定的《中医9种体质类型特征表》及《中医体质分类判定标准》对研究组和正常组的体质类型进行评定、分型。最后应用美国SPSS17.0for Windows统计软件进行数据统计。选取SPF级健康雌性8周龄BALB/C小鼠,通过阴道脱落细胞学涂片,剔除无规律动情周期小鼠。将BALB/C小鼠随机分组：POF模型4周组、POF模型8周组、左归丸4周组、左归丸8周组、己烯雌酚4周组、己烯雌酚8周组、空白对照组。除空白组外,其余小鼠均给予注射小鼠透明带3(ZP3)建立免疫性卵巢早衰模型。建模后各药物组开始灌胃给药。左归丸组灌胃浓度为2.7g/(kg.d),己烯雌酚组小鼠灌胃浓度为0.15mg/(kg.d),每只小鼠灌胃量均为0.3ml。模型组及空白对照组小鼠灌胃相同量蒸馏水,每日灌胃一次,各组均连续灌胃4周或8周。灌胃期间每日早上7点半至8点检测一次阴道脱落细胞,并记录。在相应的时间段,实验小鼠断头处死后迅速取卵巢,固定、脱水、石蜡包埋、连续切片,免疫组化法观察GDF-9、AMH、ALK2、Smadl、Smad2的蛋白表达。结果1.22例卵巢早衰患者中,最小年龄21岁,最大年龄39岁,其平均年龄为32.5岁。发病年龄主要集中在31～39岁,其中31～35岁年龄段所占比例最大,共8例,占36.36%；20～25岁年龄段所占比例最小,共3例,占13.64%。2.22例卵巢早衰患者中,平和质较少,为2例,占9.09%；体质偏颇者居多,共20例,占90.91%；体质偏颇者以气郁质居多,为9例,占40.91%；其次是阴虚质和阳虚质,分别是7例和5例(占31.82%和22.73%)；依次为气虚质4例,占18.18%；血瘀质3例,占13.64%；湿热质3例,占13.64%；痰湿质1例,占4.55%；说明卵巢早衰患者中普遍存在着体质偏颇,气郁质、阴虚质、阳虚质是卵巢早衰患者的好发体质。22例正常对照组中,以气虚质、湿热质、平和质居多。通过卵巢早衰患者与正常对照组的中医体质类型用卡方检验进行统计分析,结果P<0.05,提示卵巢早衰患者的中医体质类型与正常人的体质类型有显著差异。3.动物实验表明GDF-9蛋白及其信号转导蛋白Smad2均在卵泡颗粒细胞胞浆表达。AMH蛋白及其信号转导蛋白ALK2、Smad1亦在卵泡颗粒细胞胞浆表达。4.POF模型组小鼠动情周期停滞,以动情问期为主,阴道细胞涂片主要表现为大量白细胞及少量上皮细胞。POF模型组小鼠卵巢中生长卵泡和成熟卵泡数明显减少,几乎无成熟卵泡,闭锁卵泡增加,建模4周、8周组的卵巢生长卵泡比例明显低于空白组(P<0.0024)。POF模型4周、8周组小鼠卵巢的GDF-9、Smad2蛋白表达显著低于空白组(P<0.05)。POF模型4周组小鼠卵巢的AMH、ALK2蛋白表达明显低于空白组(P<0.05)；POF模型8周组小鼠卵巢的AMH、ALK2蛋白表达较空白组无显著差异。POF模型4周、8周组小鼠卵巢的Smad1蛋白表达明显低于空白组(P<0.0024)。结果显示POF模型小鼠卵巢GDF-9蛋白表达降低,其信号转导蛋白Smad2的表达也降低；AMH蛋白表达也降低,其信号转导蛋白Smad1、ALK2的表达也降低。建模4周的POF模型相对更稳定。5.左归丸组小鼠动情周期轻度紊乱,动情间期稍长。左归丸组小鼠卵巢中生长卵泡和成熟卵泡数较POF模型组显著升高(P<0.0024)。左归丸4周、8周组的GDF-9、Smad2蛋白表达显著高于POF模型4周、8周组(P<0.05)。左归丸4周、8周组小鼠卵巢的AMH、ALK2蛋白表达显著高于POF模型4周、8周组(P<0.05)。左归丸8周组小鼠卵巢的Smad1蛋白表达显著高于POF模型4周、8周组(P<0.0024);左归丸4周组小鼠卵巢的Smad1蛋白表达与POF模型4周、8周组比较无明显差异。结果提示左归丸组小鼠卵巢GDF-9蛋白的表达较POF模型组有明显改善,其信号转导蛋白Smad2的表达也有明显改善；AMH蛋白的表达较POF模型组有明显改善,其信号转导蛋白Smad1、ALK2的表达亦有明显改善。短期用药(建模4周)及长期用药(建模8周)均有效,但用药时间长短与治疗效果并无明星相关性。6.己烯雌酚组小鼠无明显动情周期,以动情期为主,阴道细胞涂片主要表现为大量角化上皮细胞。己烯雌酚组小鼠卵巢中生长卵泡和成熟卵泡数较POF模型组明显升高(P<0.0024)。己烯雌酚4周、8周组的GDF-9、Smad2表达显著高于POF模型4周、8周组(P<0.05)。己烯雌酚4周组的AMH表达明显高于POF模型4周、8周组(P<0.05)。己烯雌酚4周、8周组的ALK2、Smad1表达与POF模型组无明显差异。结论1.体质与卵巢早衰发生有一定的关系,POF的主要病理体质为气郁质、阴虚质和阳虚质。2.免疫性卵巢早衰的发病可能与卵巢GDF-9、AMH蛋白表达不足,GDF-9/Smad2、 AMH/ALK2/Smad1信号转导功能低下,导致始基卵泡不能有效募集,原位闭锁。3.左归丸能增加卵泡GDF-9、AMH蛋白的表达,可能通过GDF-9/Smad2、AMH/ALK2/Smad1信号转导通路发挥对卵泡的调节,起到治疗免疫性卵巢早衰的作用。