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瑞典科学家Tobias Allander等于2005年10月从下呼吸道感染婴幼儿的分泌物中发现了一种新的细小病毒,即人博卡病毒(HumanBocavirus, HBoV), HBoV是一种DNA病毒,单链线状,病毒粒子无囊膜,基因组全长5299 nucleotide (HBoV isolate st2)属于细小病毒科中细小病毒亚科里面的博卡病毒属。HBoV和所有的其他已知的细小病毒属的病毒一样,含有至少两个衣壳蛋白(VP2和VP1)和一个编码非结构蛋白(NS1)及中间开放读码框架,在病毒感染细胞时非结构蛋白NS1最先被转录和翻译,通过与病毒复制原点结合起来从而启动病毒DNA的复制。对病毒的序列分析发现一个未知蛋白ORFx,它在细小病毒科中并无同源基因。到目前为止NP1蛋白功并不清楚,采用Cratch Protein Predictor预测的NP1蛋白并用ProtFun分析后的结果显示NP1蛋白不是具有催化功能的酶蛋白,但可能与病毒基因的翻译过程有关[3]。为了对非结构蛋白基因ORFx, NP1和结构蛋白基因VPlu的功能更好研究,本实验分别对它们进行克隆,原核表达及多克隆抗体的制备。本实验根据我们实验室克隆得到的中间大片段人博卡病毒序列(该序列已经提交GeneBank,登录号为：GU 139423)设计ORFx,VP1u和NP1引物,通过PCR技术扩增目的基因。并将它们克隆到原核表达载体pMAL-c2X中,利用IPTG诱导融合蛋白的产生,并用Amylose亲和层析柱纯化含目的蛋白的融合蛋白,然后用Factor Xa切割融合蛋白MBP-ORFx和MBP-NP1,并让融合蛋白MBP-VP1u和经过切割MBP-ORFx蛋白免疫新西兰大白兔,利用切割的MBP-NP1蛋白免疫小白鼠,制备出多克隆抗体,从而为进一步研究该病毒结构蛋白基因中ORFx,VP1u和NP1的功能提供可靠的工具。