马链球菌马亚种的分离鉴定、致病性检测和抗菌药物筛选

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新疆伊犁河谷一直是马腺疫病的疫源地,而近年来发现昭苏县、富蕴县马场部分马群中不断出现以全身多发性脓肿为特征的患马,为了查明这种疑似马腺疫的病例是否与引发马腺疫的菌株相关,对分离到的马链球菌马亚种进行同源性分析,并检测菌株毒性,筛选敏感药物,指导临床用药。1、马链球菌马亚种的分离鉴定。本研究对昭苏县A、B马场采集的35份样品,常规THB增菌后,用5%绵羊鲜血培养基纯化,后用透射电镜、生化实验以及PCR技术鉴定,对分离菌fneB基因进行克隆测序分析。结果从所采集的35份样品中,共分离鉴定出2株马链球菌马亚种,这2株分离菌之间核苷酸同源性达98.6%,氨基酸同源性达96.2%。2、马链球菌马亚种对小鼠的致病性试验。先对分离菌进行生长曲线的测定,将健康昆明系白小鼠进行分组,并腹腔注射相同条件下培养的2株马链球菌马亚种菌液(各组浓度不同),用改良寇氏法计算出2株分离菌对小鼠的LD50,建立动物疾病模型,制作小鼠内脏组织病理切片。结果,本试验成功建立马链球菌马亚种感染的小鼠疾病模型。N20菌株的LD50为5.8×106 CFU/mL,N25菌株的LD50为2.25×106 CFU/mL。病理切片可见,2株分离菌对小鼠肝、肾损伤最为严重。3、马链球菌马亚种抗菌药物的筛选。将托里透脓散、黄连、金银花、连翘、野菊花、蒲公英和临床常用11种抗菌西药用于分离菌体外抑菌试验,分析所选中西药物对2株分离菌的抑菌效果。结果黄连、连翘、野菊花对2株分离菌抑菌效果明显,且跟对照组相比差异显著(P<0.05),其他药物和方剂抑菌效果不佳。分离菌N20对除了四环素以外的10种所选西药敏感;分离菌N25对大观霉素、克拉霉素、克林霉素、四环素、米诺环素、复方新诺明、呋喃妥因这7种药物敏感,对青霉素G、万古霉素耐药。本研究从全身多发性脓肿的病例中,成功分离鉴定出2株马链球菌马亚种,可见马链球菌马亚种是引起患马全身多发性脓肿的主要病原菌。2株分离菌对小鼠都有较强的致病性,且N25菌的毒性强于N20菌。体外抑菌试验中,单味药黄连的抑菌效果最好,西药中大观霉素、克拉霉素、克林霉素、四环素、米诺环素、复方新诺明效果好。
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