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羟苯氨酮(oxyphenamone,Oxy)是我院药物研究所自行设计与合成的新化合物。研究表明,它对心血管系统有明显的活性,既具有心脏的正性肌力作用,又有舒张血管的作用,对实验性心力衰竭有良好的治疗效果。其强心作用方式是通过提高心肌收缩蛋白对钙离子敏感性,是一种“钙增敏剂”。但其对血管的作用研究尚不深入,有关其舒张血管作用机理的研究更无报道。本实验计划先从离体器官水平上Oxy的扩张血管作用,进而从细胞水平深入探讨其扩张血管的作用靶点和分子机制,为新药开发提供理论依据。 主要实验方法如下: 1、离体家兔血管条生物测定(bioassay)法:制备离体家兔体循环小血管螺旋条标本,运用Krebs—Henseleit(K-H)液灌流,离体血管测等容肌张力的方法,测定目的药物Oxy对离体状态下不同血管标本的作用。 2、激光共聚焦显微镜扫描(confocal laser scanning microscopy)技术:贴块法原代培养出家兔主动脉平滑肌细胞,传代至4-6代后,第三代Ca2+荧光指示剂Fluo-3·AM负载,运用激光共聚焦显微扫描技术,监测目的药物Oxy对细胞内游离钙离子浓度的影响。 3、全细胞膜片钳(whole-cell patch clamp)技术:胶原酶法新鲜分离单个家兔肠系膜阻力血管平滑肌细胞,全细胞电压钳制状态下监测应用目的药物Oxy前后外向钾电流——钙敏感钾通道的电流变化。