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乳酸菌与肠上皮细胞的粘附是其定植在肠道并发挥益生功能的关键。唾液乳杆菌FDB86能够在肠道中粘附和定植,但介导其粘附到肠上皮细胞的粘附素及其在肠道的受体仍未被揭示。本文对FDB86的表面粘附素进行了筛选和鉴定,进一步验证了 S-层蛋白在菌株粘附中的作用和细胞表面的定位,并筛选出影响粘附的关键S-层蛋白及其在肠上皮细胞的受体。本研究揭示了唾液乳杆菌S-层蛋白与肠上皮细胞的粘附机制,对进一步了解乳酸菌与肠道的相互作用有重要意义。为了验证唾液乳杆菌FDB86的粘附能力并筛选和鉴定其表面的粘附因子,本文首先利用体外粘附实验,证明FDB86具有较高的粘附HT-29细胞和粘蛋白的能力。然后用过碘酸钠和牛血清白蛋白分别处理菌体后,菌株的粘附能力没有发生显著下降,表明胞外多糖和脂磷壁酸不是介导FDB86粘附的主要物质。用蛋白酶和LiCl处理FDB86菌体后,其粘附HT-29细胞的能力显著下降,证明菌体表面的S-层蛋白是介导其粘附的主要因子。用盐酸胍提取FDB86的S-层蛋白,发现菌株表面主要存在两种S-层蛋白,命名为SlpA和SlpB,大小分别为35kDa和55kDa左右,并且能够与粘蛋白结合,用MALDI-TOF-MS测序发现,这两种蛋白分别为M23家族肽酶和N-乙酰胞壁酸-丙氨酰胺酶,在FDB86基因组中的定位分别为DGL654和DGL683。为了进一步研究两种S-层蛋白的粘附功能和细胞表面定位,本文利用大肠杆菌原核表达两个S-层蛋白His-SlpA和His-SlpB后制备多克隆抗体,发现两种多克隆抗体对菌株粘附HT-29细胞有显著的抑制作用,并且具有浓度依赖性,表明两个S-层蛋白都参与了菌株的粘附。利用免疫荧光技术研究了 S-层在菌体表面的存在情况,结果表明,FDB86菌体与抗SlpA和SlpB的血清结合后会发出绿色荧光,而用不含SlpA和SlpB抗体的免疫前血清进行实验则没有发出荧光信号,另外,当菌体用LiCl处理去除S-层蛋白后,也基本没有荧光信号,证明SlpA和SlpB存在于菌体细胞表面。虽然SlpA和SlpB都有粘附能力,但是为了区分二者在粘附中的不同作用,找到粘附关键蛋白,本文利用pORI系统,并借助温敏质粒pTRK669,成功构建了两株slpA和slpB基因缺失突变株,并比较了两个突变株的粘附能力。结果表明,△slpA突变株粘附HT-29细胞的能力下降62%,AslpB突变株下降16%,△slpA突变株粘附粘蛋白的能力发生极显著下降,而△slpB突变株粘附粘蛋白的能力发生显著下降,证明SlpA是FDB86的粘附关键蛋白。SlpA与肠上皮细胞表面的受体发生特异性结合后才能完成粘附过程。本文用Pull-down实验检测到FDB86关键粘附蛋白His-SlpA在HT-29细胞上的一个受体蛋白,大小为50 kDa左右,并通过MALDI-TOF-MS测序获得受体蛋白的氨基酸序列,经过NCBI序列比对分析表明受体为烯醇化酶（ENO1）。用Western blot和免疫共沉淀实验验证了 SlpA和ENO1能够发生相互结合。利用受体ENO1的抗体进行抗体调节的抑制实验,结果表明,ENO1的抗体可以显著抑制FDB86对HT-29细胞的粘附,进一步验证了 ENO1是SlpA的粘附受体。