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抗菌肽(Cecropin B)是由37个氨基酸残基组成的线性多肽，分子量约为4kD，在疏水环境中易形成两亲性(Amphipathic)α-螺旋，热稳定，水溶性好。Cecropin B作用于靶细胞的细胞膜，这一机制显著区别于传统的抗生素，具有抗菌、消炎等作用，近年来发现还有抗肿瘤及抗艾滋病病毒的活性，引起了国内外研究者的广泛关注。从生物组织中分离获得大量抗菌肽难度大，人工合成成本高，利用基因工程的方法表达抗菌肽成为近年来的研究热点之一。
泛素是高度保守、由76个氨基酸组成的小分子蛋白质，广泛存在于真核生物中。有研究表明，泛素与目的蛋白重组融合表达可显著提高目的蛋白的表达量，并且在真核细胞中存在特异性蛋白酶将表达的融合蛋白在泛素的76位Gly末端切割，释放完整的重组目的蛋白。本研究构建二个表达载体，在大肠杆菌与无细胞翻译体系中表达抗菌肽，获得以下主要结果：
1．抗菌肽基因Cecropin B在大肠杆菌中的融合表达
pET28b(+)是目前被广泛使用的一种高效表达外源蛋白的克隆表达载体，为确保获得完整的抗菌肽，在His Tag序列标签与Cecropin B基因之间设计特异的蛋白酶识别位点，为此，在PCR扩增Cecropin B基因的上游引物的设计上引入了可翻译成6个特定氨基酸Gly—Asp-Asp-Asp-Asp-Lys的核苷酸序列，肠激酶识别的切割位点在Lys残基上。通过PCR扩增获得带有肠激酶识别位点的Cecropin B基因，将其与表达载体pET28b(+)重组，构建了表达载体pET-Cep B，转化E.colt BL21(DE3)，IPTG诱导表达。
表达产物经Tricine-SDS-PAGE电泳检测，在预期的相应位置出现了特异的蛋白条带，初步表明Cecropin B基因在E.coli BL21(DE3)宿主菌中成功表达。分离纯化融合蛋白后，用肠激酶将N端的融合部分切除，得到完整抗菌肽，抑菌实验结果初步显示，表达的Cecropin B蛋白具有抑菌活性。
2．抗菌肽Cecropin B基因在麦胚无细胞蛋白合成体系中的表达
本研究将抗菌肽Cecropin B基因与载体pF3AWG(BYDV)重组，在麦胚无细胞蛋白合成体系中表达抗菌肽，并用overlap extension PCR的方法将小麦的Ubiquitin基因与抗菌肽Cecropin B基因融合来进一步提高抗菌肽的表达量。
把经PCR扩增得到的Cecropin B基因和Ubi-Cep B基因经过双酶切后与载体pF3AWG(BYDV)连接，获得含Cecropin B和Ubi-Cep B基因的重组表达载体，PCR扩增、体外转录，将获得的RNA纯化后在麦胚无细胞体系中表达蛋白Cecropin B。实验结果表明Cecropin B基因已整合到载体pF3AWG(BYDV)上，且体外转录成功；Tricine-SDS-PAGE小分子量蛋白电泳结果显示Cecropin B蛋白获得了表达，且表达的抗菌肽具有抑菌活性。含Ubi-Cep B基因的片段体外转录实验失败，未能验证小麦Ubi基因在麦胚无细胞蛋白合成体系中的功能。