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目的：
1.优化克雷伯脂肪酶产生菌Klebsiella sp.B2的产酶条件，并对其粗酶性质进行研究。
2.克隆Klebsiella sp.B2的脂肪酶基因，并将其在大肠杆菌中表达，并对重组酶性质进行研究。
方法：
1.利用单因素的实验方法对Klebsiella sp.B2的碳源、氮源及其浓度和初始pH值、金属离子、温度等产酶条件进行优化。
2.利用NaOH滴定的方法对Klebsiella sp.B2的粗制脂肪酶性质进行了研究。
3.利用PCR技术克隆Klebsiella sp.B2的脂肪酶基因，并利用大肠杆菌表达系统对其进行表达。利用单因素分析方法对重组酶性质进行了研究。
结果：
1.Klebsiella sp.B2的最佳发酵培养基(g/L)为：蛋白胨10，MgSO4.7H2O0.5，K2HPO410，KH2PO44.5，菜籽油20。最佳发酵条件：28-30℃，初始pH7.5，200rmp摇床72h。
2.粗酶的性质：最适催化温度和pH分别为40℃和8.0，该酶具有较差的热稳定性，在60℃保温1h后，只剩下50％的酶活性。Mg2+、Ca2+和K+等金属离子对酶活性具有正效应作用，其它金属离子对该酶的活性影响甚微，而EDTA和SDS等螯合剂对酶活性具有明显的抑制作用。
3.利用pET表达系统成功的在大肠杆菌中表达了Klebsiella sp.B2的脂肪酶基因，SDS-PAGE电泳显示重组蛋白，分子量约为54.2kDa。
4.重组酶的最适作用温度和最适作用pH分别为45℃和8.0，该酶的热稳定性较差。
5.测定了不同金属离子对重组酶活性的影响，发现Mg2+、Ca2+和K+等金属离子对酶活性具有正效应作用，其它金属离子对该酶的活性影响甚微，而EDTA和SDS等螯合剂对酶活性具有抑制作用。