【摘 要】
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1．研究背景和目的：骨髓微环境可以保护白血病细胞，促使白血病细胞耐药，导致化疗后微小病灶残留（minimal residual disease MRD）成为复发的根源。本实验在体外分离培养初治慢性粒细
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1．研究背景和目的：骨髓微环境可以保护白血病细胞，促使白血病细胞耐药，导致化疗后微小病灶残留（minimal residual disease MRD）成为复发的根源。本实验在体外分离培养初治慢性粒细胞白血病患者的骨髓原代基质细胞（bone marrow stromal cellBMSC），模拟慢性粒细胞白血病患者骨髓微环境，观察慢性粒细胞白血病骨髓基质细胞对K562细胞的保护作用，以及K562细胞经过As2O3单药及与常规化疗药物联合处理后，细胞间粘附作用及对药物敏感性的变化，探讨As2O3逆转细胞粘附介导的耐药（CAM—DR）的作用及其机制。
2．实验方法:
2．1细胞培养及实验分组
分离慢性粒细胞白血病患者骨髓基质细胞进行原代培养后，模拟白血病骨髓微环境与K562细胞共培养，同时设K562细胞悬浮培养为对照组。
2．2 MTT法测定药物对K562细胞的生长抑制作用
通过MTT法检测K562细胞对化疗药物的敏感性及As2O3与化疗药物联合的效应。通过对存活细胞百分数和药物浓度的线性回归分析方法计算IC50值。用金正均q值法分析药物之间相互作用。
2．3流式细胞学检测细胞凋亡
用AnnexinV/PI双染法检测共培养组和悬浮组K562细胞凋亡率的差异，观察As2O3对两组细胞凋亡率的影响。
2．4骨髓基质细胞对K562细胞粘附率测定
将K562细胞按浓度或用药时间两种方式处理后与BMSC粘附，通过粘附冲洗实验观察经As2O3处理后K562细胞粘附率变化。
2．5蛋白免疫印记检测β1整合素蛋白水平的表达
将按浓度或用药时间两种方式处理后处理过的K562细胞提取全细胞蛋白，用蛋白酶免疫印迹法检测β1整合素蛋白表达的情况。
2．6统计学处理
数据采用x—±s表示，利用SAS8．0软件进行统计分析。采用t检验，P<0．05即认为有统计学意义。
3．结果：
化疗药物对共培养后的K562细胞抑制率与单独悬浮培养组比较显著降低：0．1μM Ara—C抑制率（47．1±8．5％ VS35．2±2．1％），DNR IC50（0．045±0．006 VS0．082±0．009μM，P<0．01）；然而As2O3对共培养后的K562细胞与单独悬浮培养组比较IC50无明显差异（1．602±0．392 VS1．681±0．142μM，P>0．05），且As2O3与化疗药物联合作用时两组间抑制率也无明显差异。通过金正均Q值法分析得出：在悬浮组药物联合为相加作用，而共培养组这种联合表现出协同作用。流式细胞学检测发现，共培养后骨髓基质细胞抑制化疗药物诱导的K562细胞凋亡，与单独悬浮培养组比较显著降低，而与As2O3联合后凋亡率无明显差异。As2O3处理后K562细胞粘附率及β1整合素表达均随As2O3浓度增加而下降。
4．结论：As2O3通过下调K562细胞β1整合素的表达，逆转细胞粘附介导的耐药。
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