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目的: 对于人体软骨组织来说,组织工程的应用,为软骨创伤的治疗提供了新的手术方案.原理主要是在体外培养软骨细胞,通过软骨细胞在体外的增殖来获取大块软骨组织,用于修复软骨组织的病损.而鼻中隔软骨作为人体中最容易得到的软骨组织,可试用于组织工程学研究.本实验分离、培养人鼻中隔软骨细胞,并与猪脱细胞真皮基质(Porcine acellular dermal matrix PADM)结合,研究两者相容特性,为软骨移植提供了理论依据. 方法: 1.术中分离人鼻中隔软骨细胞后,培养人鼻中隔软骨细胞,并进行传代培养,定期观察细胞生长状态,描绘生长曲线,同时行DAPI、甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原免疫荧光染色来观察细胞形态及生长情况.2.将传代后生长状态较好的人鼻中隔软骨细胞种植在PADM上,对两者相容性进行研究.当细胞在PADM上生长一定时间后,行组织化学染色以及场发射扫描电镜检查,观察人鼻中隔软骨细胞在PADM上的形态.同时行RT-PCR检测,判断PADM上细胞的功能. 结果: 实验最终成功分离及培养了人鼻中隔软骨细胞,显微镜下观察成熟软骨细胞为多角形,少许似梭形.待第三代人鼻中隔软骨细胞体外培养1周后,行Ⅱ型胶原免疫荧光染色显示细胞核及胞浆分别呈蓝色及红色阳性染色.DAPI染色可见培养皿表面细胞分布,形态为类圆形,较规则,密度较均匀.甲苯胺蓝染色可见玻片表面大量蓝染的不规则多角形细胞.MTT法显示第三代人鼻中隔软骨细胞的增殖方式正常. 将第三代人鼻中隔软骨细胞在PADM上培养一周后行DAPI、甲苯胺蓝染色后,在显微镜下可见PADM结构上大量细胞分布,密度均匀.扫描电镜示:鼻中隔软骨细胞在PADM表面及孔隙内能充分黏附、伸展及生长,相邻细胞突起可相互连接.RT-PCR结果显示:PADM中人鼻中隔软骨细胞与单纯人鼻中隔软骨细胞相比,所产生的CollagenⅡ,CollagenⅩ,SOX9,Aggrecan以及成骨相关的CollagenⅠ的表达无明显差异(P大于0.05). 结论: 通过该实验,对人鼻中隔软骨细胞成功进行分离及传代培养,经形态学观察以及组织化学染色对细胞进行初步了解.同时行MTT法对人鼻中隔软骨细胞的增殖进行检测,证明人鼻中隔软骨细胞在体外的生长状态良好.之后将最稳定的第三代人鼻中隔软骨细胞种植于PADM上.培养后,经组织化学染色、扫描电镜及RT-PCR检测,证明PADM上培养的第三代人鼻中隔软骨细胞形态及生长状态良好. 经以上研究,证实人鼻中隔软骨细胞在体外能够正常生长及分裂,其在PADM上培育后,仍能够保持正常的繁殖能力,且与PADM有很好的生物相容性,为软骨组织工程学提供了研究基础.