玉米大斑病菌StLAC2基因与黑色素合成及致病性关系研究

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:JSHjanet
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玉米大斑病菌DHN黑色素合成途径中关键酶基因的缺失可导致病菌丧失致病性,本实验室前期克隆并获得了玉米大斑病菌漆酶基因StLAC2,为进一步明确StLAC2基因在黑色素合成及致病过程中的作用,本研究利用同源重组方法获得了玉米大斑病菌漆酶基因StLAC2的敲除突变体,对其进行表型、黑色素合成及致病力分析,证实了StLAC2基因在黑色素合成中起着关键作用并对病菌致病性有重要影响。主要研究结果如下:1.利用pUCATPH、pBS质粒,构建了StLAC2基因双交换同源重组载体pBC-StLAC2。2.采用PEG介导转化法将重组质粒转化玉米大斑病菌原生质体,获得了2株玉米大斑病菌StLAC2基因缺失突变体,分别命名为△StLAC2-1和△StLAC2-2。3.在PDA培养基上突变体△StLAC2-1和△StLAC2-2菌落及菌丝颜色变浅,漆酶活性降低,菌丝黑色素含量下降,不能产生分生孢子。4.将野生型菌株、突变菌株△StLAC2-1和△StLAC2-2的菌丝悬浮液在玻璃纸上黑暗孵育后,野生型菌株的菌丝发育产生了附着胞并能够穿透玻璃纸膜,次生菌丝在玻璃纸下的琼脂表面继续生长;而突变菌株的菌丝不能发育产生附着胞,生长出的新菌丝只能在玻璃纸膜表面蔓延生长,不能穿透玻璃纸膜。5.致病力测定结果表明,突变菌株不能侵入完整(未经过刺伤处理)玉米叶片,但仍能侵染经过刺伤处理的玉米叶片。以上结果表明,漆酶基因StLAC2在玉米大斑病菌分生孢子产生、黑色素合成、附着胞发育以及穿透寄主表皮细胞等方面具有重要作用。
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