【摘 要】
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目的:本研究目的为探索SPARCL1是否与早期自然流产有关,研究SPARCL1在人滋养细胞迁移中的作用与机制。方法:1.收集2015-2016年在上海交通大学医学院附属仁济医院因胚胎停育和主动要求终止妊娠行人工流产术的患者的绒毛组织样本,提取mRNA与蛋白,通过蛋白免疫印迹法与荧光实时定量PCR检验,比较两组间SPARCL1的表达是否有差异。2.构建pIRES2-EGFP-SPARCL1重组质粒,
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目的:本研究目的为探索SPARCL1是否与早期自然流产有关,研究SPARCL1在人滋养细胞迁移中的作用与机制。方法:1.收集2015-2016年在上海交通大学医学院附属仁济医院因胚胎停育和主动要求终止妊娠行人工流产术的患者的绒毛组织样本,提取mRNA与蛋白,通过蛋白免疫印迹法与荧光实时定量PCR检验,比较两组间SPARCL1的表达是否有差异。2.构建pIRES2-EGFP-SPARCL1重组质粒,同时以空载质粒pIRES2-EGF-Enter作为对照。选取HTR8/SVneo与JAR细胞株作为研究模型,通过脂质体转染法使细胞过表达SPARCL1基因,通过划痕实验比较过表达组与对照组的细胞迁移能力。3.在细胞培养液中添加1ug/mL人重组SPARCL1蛋白,通过划痕试验检测其与对照组的细胞迁移能力是否有差异。4.通过CCK8法检测过表达SPARCL1基因是否影响了细胞的增殖活性。5.收集质粒转染及相应对照组细胞,提取RNA及蛋白,通过荧光实时定量PCR及蛋白免疫印迹法检测实验组与对照组间MMP2、MMP3、E-CADHERIN、NCADHERIN、VIMENTIN的mRNA与蛋白含量是否有差异。6.在划痕实验后添加含有SPARCL1的上清液,提取蛋白,进一步通过蛋白免疫印迹法检测实验组ERK1/2通路磷酸化活性及AP-1蛋白表达与对照是否有差异。结果:1.在自然流产组与正常组的绒毛组织中,SPARCL1的mRNA水平及蛋白表达存在显著差异（P<0.05）,自然流产患者的绒毛组织中SPARCL1基因显著上调,蛋白表达水平也高于正常。2.添加人重组SPARCL1蛋白及过表达SPARCL1后,HTR8/SVneo细胞的迁移距离与迁移面积与对照存在差异。过表达SPARCL不影响HTR8/SVneo细胞增殖活性。3.HTR8/SVneo细胞过表达SPARCL1后,相较于对照组,MMP2、MMP3、VIMENTIN的表达降低,E-CADHERIN的表达升高。JAR细胞过表达SPARCL1后,相较于对照组,MMP3、VIMENTIN、NCADHERIN表达降低,E-CADHERIN表达升高。4.对HTR8/SVneo进行划痕实验并添加含有SPARCL1上清液后,相较于对照组,ERK1/2通路磷酸化活性与AP-1蛋白的表达均有降低。5.自然流产组的绒毛组织中,SPARCL1与MMP2mRNA表达呈显著负相关（P=0.0261）,Pearson系数-0.4962;SPARCL1与VIMENTIN的mRNA表达呈负相关（P=0.0356）,Pearson系数-0.4842。结论:1.自然流产组的绒毛组织中SPARCL1的表达明显高于正常早孕组。2.SPARCL1可以下调滋养细胞的迁移与侵袭能力。3.SPARCL1可能通过下调ERK1/2通路的磷酸化活性与AP-1的合成使MMP2、MMP3、N-CADHERIN、VIMENTIN表达下降,E-CADHERIN表达升高,从而影响了滋养细胞的分化与迁移侵袭的功能,妨碍了子宫螺旋动脉重铸与胎盘床的发育,参与了自然流产的病理过程的发生。
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