目的：　　1.从牛蒡子药材中提取牛蒡子苷，优化提取分离及纯化工艺，将所得牛蒡子苷纯品作为本课题研究试药应用到后续研究中，同时为牛蒡子苷的工业生产工艺提供实验依据。　　2.研究牛蒡子苷（AT）对高糖作用下的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）增殖、迁移和血管生成是否有抑制作用，并从其对血管内皮生长因子（ VEGF-A）、低氧诱导因子（ HIF-1α）、PI3K/Akt及MAPK/ERK信号通路的影响入手，探讨其作用机制，寻找作用靶点，为糖尿病视网膜病变（DR）的防治提供新的途径。　　方法　　1.以AT含量为指标，通过正交试验，优化AT的醇提工艺；经过大孔吸附树脂柱粗分，筛选出效果最好的吸附分离方法；最后采用硅胶H柱层析，纯化AT，得到AT纯品。　　2.体外培养HUVECs，应用高糖（25.0 mmol/L）诱导建立细胞模型。MTT法、流式细胞术检测不同葡萄糖浓度对 HUVECs的影响， DAPI染色等方法观察 AT对高糖诱导的 HUVECs凋亡情况的影响；MTT法检测AT对细胞增殖作用的影响，划痕实验检测AT对细胞迁移能力的影响，体外小管形成实验检测 AT对细胞血管生成的影响，western blotting法检测AT对HIF-1α、VEGF-A、PI3K、Akt、 Ras、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达的调控作用。　　结果　　1.通过正交试验设计，确定了 AT的最佳醇提工艺为：脱脂后的牛蒡子干燥粉末，经8倍量90％乙醇，回流提取3次，每次2 h，得AT醇提浸膏。醇提浸膏用20%乙醇溶解加水稀释后静置得上样液，过AB-8型大孔吸附树脂柱，收集50%乙醇洗脱液，得AT粗分物。AT粗分物经硅胶H层析柱，氯仿：甲醇（9:1）洗脱，TLC跟踪，收集单点流份，重结晶得AT纯品，纯度达98%以上。　　2. MTT法检测结果显示高糖能促进细胞增殖；DAPI染色法、流式细胞术检测结果显示高糖不会导致细胞凋亡，AT对细胞凋亡也没有影响。MTT检测结果显示，经高糖刺激3、5、7 d后，与LG组比较， HG组细胞增殖能力明显增加（P<0.01）；与HG组比较，HG+AT组的细胞增殖能力明显降低（P<0.05或P<0.01）。划痕实验结果显示， HUVECs在高糖刺激下，与LG组比较，HG组细胞迁移能力明显增大（P<0.01）；与HG组比较，HG+AT组的细胞迁移能力明显下降（P<0.01）。小管形成实验显示，4 h时，HUVECs在高糖刺激下，与 LG组比较，HG组细胞血管腔形成能力增强（P<0.01）；与HG组比较， HG+AT组的细胞血管腔形成能力明显下降（P<0.01）。western blotting法检测结果显示，高糖诱导的HUVECs中HIF-1α、VEGF-A、PI3K、Akt、Ras蛋白表达量及 p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达量比值均增加（P<0.05或P<0.01），经药物处理后蛋白表达量均下降（P<0.05或P<0.01）。　　结论　　1.本课题确定的 AT提取纯化方法方便、稳定，为工业大生产提供可靠的实验依据。　　2. AT能够抑制高糖诱导的血管内皮细胞增殖、迁移能力，阻碍血管生成。　　3. AT的这一作用可能是通过抑制HIF-1α、VEGF-A的表达，阻碍Ras-PI3K/Akt及MAPK/ERK1/2信号通路的激活，从而抑制核内多种转录因子转录、细胞因子分泌，循环往复，起到抑制高糖诱导的血管内皮细胞血管生成作用。