论文部分内容阅读
目的:以携带有目的基因IL-24的穿梭质粒pAd track CMV转染C33A细胞,观察IL-24对人宫颈癌C33A细胞凋亡、体外增殖及迁移力的影响。方法:将IL-24真核表达载体padtrack-cmv/IL-24和空载体padtrack-cmv分别用脂质体法转染体外培养的C33A细胞,以转染空载体pAd track CMV的C33A细胞作为空载体对照,以C33A细胞作阴性对照,在荧光显微镜下观察转染荧光效应,用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡指数,细胞划痕实验观察细胞迁移力变化。结果:1.IL-24组、空载体组及阴性对照组C33A细胞于荧光显微镜下观察,可见IL-24组、空载体组大量细胞发绿色荧光,阴性对照组细胞未见绿色荧光。2.IL-24组、空载体组及阴性对照组C33A细胞MTT比色法测定,三组之间的OD值差异有显著性(P<0.001,P<0.001)。IL-24组OD值明显低于空质粒组和阴性对照组(P<0.05),而空质粒组和阴性对照组的OD值无明显差异(P=0.993)。生长曲线图中后两者生长曲线相似,IL-24转染组细胞增殖受到明显抑制。3.流式细胞仪检测未转染、转染空载体及转染IL-24后的各组C33A细胞平均凋亡率分别为3.34%,3.37%,13.47%。三组C33A细胞凋亡细胞率的差异具有统计学意义,两两比较,IL-24组凋亡率与其他两组有统计学意义(P<0.001,P<0.001),IL-24组细胞早期凋亡率明显高于空质粒组和阴性对照组,空载体组与阴性对照组比较无统计学意义(P=0.969),在周期检测中,三个实验组G0/G1、S、G2/M期细胞比例的总体差异均具有显著性(G0/G1:F=77.491,P<0.001;S:F=8.008,P<0.05;G2/M:F=10.502,P<0.05)。与空质粒组和阴性对照组相比,IL-24组G0/G1期细胞比率增多(PG0/G1<0.001),S期细胞比率减少(PS<0.05),G2/M期细胞减少(PG2/M<0.05),而空质粒组和阴性对照组无明显差异(PG0/G1=0.485,PS=0.971,PG2/M=0.447)。4.细胞划痕实验中,不同时间点镜下比较IL-24组、空载体组及阴性对照组划痕宽度变化,IL-24转染组细胞迁移力受到抑制,划痕愈合速度较慢。结论:1.IL-24基因可以将C33A细胞阻滞于G0/G1期,对C33A细胞的体外增殖,迁移有抑制作用;2.IL-24基因有诱导C33A细胞凋亡作用;3.IL-24基因用于宫颈癌的基因治疗可能具有潜在价值。