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本文主要从以下几方面进行论述: 第一部分 对Hippo信号通路核心成员Yorkie的入核调控机制的研究 Hippo信号通路通过控制细胞增殖和细胞凋亡来调节组织器官的大小。当Hippo信号通路上游信号被抑制,转录辅因Yki便可以进入细胞核中与转录因子Scalloped(Sd)结合,进而促进Hippo下游的靶基因的转录。因此,Yki的入核是Hippo信号通路中至关重要的一步。在该研究工作中,我们利用模式生物果蝇发现Yki蛋白N端可能存在一段非经典核定位序列,缺失该段序列明显抑制Yki的入核及活性。通过质谱筛选和生化实验分析,我们发现核转运蛋白Importinα1通过结合YkiN端介导Yki的入核。进一步的体内和体外实验表明,Yki蛋白N端的R15位点在这一过程中发挥着关键作用。与此同时,本项工作还发现Hippo信号通路上游激酶Hippo能够抑制由Importinα1介导的Yki入核。这些发现进一步揭示了Hippo信号通路调控的分子机制,有助于人们深入理解Hippo信号通路,特别是原癌基因Yki在调控组织生长及肿瘤发生中的作用。 第二部分 筛选和鉴定Hippo信号转导通路中调控转录因子Sealloped活性的新成员 Hippo信号通路能通过抑制细胞增殖,促进细胞凋亡控制组织器官的大小,Hippo通路核心转录因子Sd/Tead与癌症的发生密切相关。由于Hippo信号是一个相对较新的信号转导通路,其信号网络仍在不断完善过程中,尤其对转录因子Sd的活性调控机制知之甚少。为此,我们制各了Sd的内源抗体,通过免疫共沉淀结合质谱分析,发现了转录因子Lola。初步实验表明,Sd可以与Lola相互作用,并且共同定位在细胞核中。体内免疫荧光染色实验证明,Lola可以通过影响Sd的活性调控Hippo信号通路的靶基因表达。另外,由于Hippo信号通路可以调节果蝇肠干细胞的增殖,Lola也被报道可以影响干细胞的干性,我们将利用果蝇肠干细胞系统,研究Lola是否可以在肠干细胞中通过调节Sd的活性影响成体干细胞的增殖与分化。最终,我们还将深入研究Lola是否可以结合Sd的启动子序列,从转录水平阐明其参与Hippo信号调控的机制。