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本研究对河北地区的IBV分离株进行S1基因的遗传进化分析以及中草药体外抗IBV的试验以便确定河北地区流行IBV的基因型、IBV遗传进化和重组情况,并探讨中草药在体外抗IBV的机制。研究内容及结果包含以下四部分:1.河北地区IBV的分离鉴定对来自河北地区养殖场118份疑似IBV感染的病料通过鸡胚尿囊腔接种,盲传5代后进行PCR鉴定。并将阳性病料接种鸡胚和雏鸡,观察鸡胚病变及雏鸡的发病情况。综合PCR鉴定、鸡胚病变情况和雏鸡致病性试验结果获得11株IBV地方株。2.河北地区IBV的遗传进化分析将S1基因目的条带纯化后构建质粒,验证为阳性的质粒送去测序。从Gen Bank中选取53株参考株,利用DNAStar软件分析河北株S1基因核苷酸和氨基酸序列的同源性,采用MEGA软件中的Neighbor-Joining方法构建S1基因的遗传进化树,采用RDP4、Sim Plot软件分析河北株的重组事件,使用在线软件Yin OYang-1.2和Net NGlyc-1.0分别进行O-、N-糖基化位点分析,使用DNAstar软件分析IBV分离株S1蛋白裂解位点。结果显示:S1基因全长1 611bp～1 621 bp,编码约540个氨基酸。11株分离株S1基因核苷酸序列的同源性为92.8%～99.9%;11株分离株与国内外53株参考株的同源性为73.0%～96.7%,与国内常用疫苗株M41、H120、W93、Ma5和QX的同源性为74.7%～96.1%。11株分离株S1基因氨基酸序列间的同源性为92.4%～99.6%,与53株国内外IBV参考株S1基因氨基酸序列的同源性为68.9%～94.9%,其中和国内GI-19基因型参考株S1基因序列的同源性为88.0%～94.9%,与国内常用疫苗株的同源性为70.9%～92.4%。遗传进化分析显示11株分离株与GI-19基因型（QX型）IBV属于同一分支。基因重组显示分离株HB.SJZ.21和HB.XT.1是两株重组病毒,HB.SJZ.21株可能是由HB.XT.9株和HB.SJZ.8株重组而成,HB.XT.1株可能是由HB.SJZ.8株和智利分离株重组而成。结果表明,河北地区IBV流行株为GI-19基因型,与疫苗株相比存在不同程度的变异,且分离株之间存在重组现象。11株IBV分离株的S1蛋白裂解位点是一致的,且大多数分离株的N-连接和O-连接的糖基化位点表现出了一定的保守性。3.抗IBV中草药体外筛选实验利用传统水煎法提取18味中草药,利用CPE观察和CCK-8法两种检测方法确定18味中草药和利巴韦林对CEK细胞的最大安全浓度,并初步筛选出体外抗IBV的有效中草药。结果表明,18味中药的最大安全浓度范围在0.0781mg/m L～10mg/m L之间;IBV的TCID50为10-4.67/0.1m L,黄芪、板蓝根、甘草、蒲公英、金银花抗病毒效果最好,有效抑制率在80%以上,利巴韦林、葱须、鱼腥草、千金藤、石榴皮、北豆根有效抑制率在75%以上。采用三种中草药作用于病毒的方式,以确定中草药抗病毒的最佳途径。在直接杀伤的作用方式中,蒲公英、甘草、黄芪、北豆根对病毒的杀伤效果较好,有效抑制率分别为81.53%、75.85%、75.14%、75.12%;在吸附阻断的作用方式中,甘草、板蓝根、连翘对病毒的吸附阻断作用较强,对IBV的有效抑制率分别为83.60%、83.30%、77.92%,相比利巴韦林有效抑制率分别提高了7.86%、7.56%、2.18%;在复制阻断作用方式中,黄芪、鱼腥草、千金藤、金银花、利巴韦林对IBV的抑制率分别为83.59%、79.91%、75.47%、75.11%、63.45%,利巴韦林对IBV的有效抑制率低于除紫锥菊外的其他15种中草药。4.中草药体外抗IBV的机制初探在CEK细胞上用中草药复制阻断IBV的作用方式,利用荧光定量PCR技术检测CEK细胞中相关因子m RNA相对表达量。与病毒对照组相比,连翘、葱须、金银花可通过MDA5信号通路极显著地提高IBV感染后CEK中IFN-α、IFN-β的m RNA表达水平,除黄芪外的其他药物均显著上调了MAVS的m RNA水平。鱼腥草、石榴皮、贯众、千金藤、板蓝根、黄芪、红景天、黄芩、北豆根、甘草通过NF-κB信号通路极显著地降低了IL-6和TNF-α的m RNA表达水平。综上所述,通过鸡胚尿囊腔成功分离出11株GI-19型IBV。在18味中草药中筛选出16味中草药对IBV有一定的抑制作用。通过三种作用方式检测出大多数中草药抗IBV的最佳作用方式是复制阻断作用。中草药可通过MDA5信号通路显著提高IBV感染后CEK中IFN-α、IFN-β的m RNA表达水平,除黄芪外的其他药物试验组均显著上调了MAVS的m RNA水平,中草药通过NF-κB信号通路显著降低了IL-6和TNF-α的m RNA表达水平。