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已烯雌酚（Diethylstilbestrol,DES）作为一种人工合成的非甾醇类雌激素,在临床治疗、畜牧生产中有着广泛应用,但是DES的残留会对人体产生一系列的毒副作用。因此,许多国家和地区已明确禁止DES在食品动物中的使用。然而受经济利益的驱使,非法使用和滥用现象依然存在。为确保动物食品安全和我国畜牧水产品出口贸易的畅通,建立快速、灵敏的检测技术已成为当前迫切需要解决的一个重要问题。DES残留分析中,样品前处理是核心。免疫亲和层析技术与传统的样品前处理技术相比,操作简单、具有高选择性的净化和富集能力,是一种有着良好应用前景的样品前处理技术。本论文以免疫学为基础,制备并确证DES完全抗原和单克隆抗体,并对其免疫亲和层析柱的制备与使用技术进行初步研究,为建立以免疫亲和层析为核心的样品前处理技术奠定基础。主要研究内容和结果如下:1.琥珀酸酐法合成已烯雌酚半琥珀酸酯（DES-HS）,得率较高的反应条件为:DES、HS摩尔比为1:10;温度45℃;时间48 h。采用混合酸酐法和碳二亚胺法制备完全抗原,用紫外光谱法、SDS-PAGE、红外光谱法、高分辨率质谱法逐步确证和监测完全抗原的制备成功,并计算出载体蛋白BSA与DES-HS的偶联率为1:26。2.选择6～8周龄的Ballb/C雄性小鼠进行免疫,研究了免疫方式、免疫剂量、载体蛋白及免疫次数对免疫效价的影响。结果表明:背部皮下多点注射比腹腔注射免疫效价高;免疫剂量（100/50μg/只和200/100μg/只）对免疫效价无显著影响;KLH作载体的免疫效价高于BSA作载体;免疫四次即可获得较高的免疫效价。3.建立了DES间接非竞争ELISA法:100 ng DES/孔37℃包被2 h;5%的脱脂奶粉4℃封闭过夜;一抗37℃作用2 h;HRP-IgG 3000倍稀释,37℃反应2 h;显色液37℃作用15 min。4.利用PEG法进行细胞融合,采用有限稀释法进行三次亚克隆,筛选得到能稳定分泌抗DES的亚型为IgG3单抗的杂交瘤细胞株18G5。蛋白G亲和层析纯化腹水获得抗体蛋白。紫外光谱测定其浓度为1.015 mg/mL;SDS-PAGE显示其分子量约为150 KD;间接非竞争ELISA测定其效价为10000,最佳工作浓度为1000倍稀释;计算得其亲和常数为1.48×109。间接竞争ELISA测得DES抑制标准曲线方程为y=-0.2145x+0.4713,R2=0.9965,线性区间为0.1～20 ng/mL,半抑制浓度IC50为0.735 ng/mL;与结构类似物已烷雌酚、双烯雌酚的交叉反应率分别为0.37和0.98。5.以BrCN活化的Sepharose 4B为载体,以纯化的18G5的腹水型单克隆抗体作为配基,制备的免疫亲和层析柱对DES的回收率为62.2%。