概况：非小细胞肺癌治疗的首选仍是手术切除，决定术后生存时间长短的主要因素当属术后的临床病理分期。然而，令人费解的是早期(Ⅰ期)非小细胞肺癌患者，仍有相当一部分术后出现肿瘤复发或转移，其术后5年生存率亦仅有60％～70％。对于上述现象，一些学者推断可能是由于常规临床病理分期不准所致，即部分“早期”非小细胞肺癌患者，由普通苏木精伊红(H&E)染色病理组织学检查所得出的TNM分期存在偏低现象，也就是说H&E染色未能检测出淋巴结中肿瘤细胞的微小转移灶。因此，对非小细胞肺癌患者所有淋巴结进行更加精细的检查，所得到的结果对临床医师更加准确地进行临床病理分期，判断预后和指导治疗有重要的意义。 随着现代免疫学和分子生物学的发展，研究人员可以借助于各种免疫组织化学(IHC)染色或逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增技术，能更加准确地找到那些存在于机体中的肿瘤微小转移灶。近年来，乳腺癌、结肠癌或胃癌患者的淋巴结、骨髓或外周血中肿瘤细胞微小转移的研究报道较多，而关于非小细胞肺癌方面的报道则相对较少。 方法：为探讨非小细胞肺癌患者各区域淋巴结中有无肿瘤细胞的微小转移，2003年4月到2004年2月，对照研究了部分非小细胞肺癌患者的淋巴结。这些淋巴结标本的采样、分组均在手术过程解放军总医院军医进修学院博士学位论文中进行。术中把每枚淋巴结平均分成两半，按照随机化的原则，将一半的淋巴结10%福尔马林浸泡固定，用于H&E染色和(或)IHC染色病理检查;而将另一半淋巴结低温液氮冷冻，用于RT-PCR扩增分析。 每枚淋巴结标本都接受H&E染色常规病理检查。先将每枚淋巴结标本进行石蜡包埋，然后连续切片，切片厚为sum，6一10张切片不等。选择第一和倒数第二张切片进行H&E染色病理检查，剩余的其它切片用于形C染色检查，mC染色中所选择的抗体为鼠抗人细胞角蛋白广谱单克隆抗体。 用于RT-PCR扩增分析的另一半淋巴结，按区域分为肺门和纵隔两组，同组中的所有淋巴结混在一起进行Rr~PCR扩增分析。 本实验中，如果一枚淋巴结H&E染色病理证实有肿瘤细胞的显性转移，那么，该患者同一区域的其它淋巴结将不再接受IHC染色和RT-PcR扩增分析。 结果:1、25例非小细胞肺癌患者中，有195枚淋巴结石蜡块接受了H&E染色病理组织学检查。其中9例(36.0%，9/25)共30枚淋巴结(巧.4%，30/195)发现有肿瘤细胞的显性转移，转移癌巢的大小都在Zmm以上。无一例患者的淋巴结H&E染色病理法检出肿瘤细胞的微小转移。2、从25例非小细胞肺癌患者中，挑选了135枚H&E染色为阴性的淋巴结石蜡块进行了IHC染色病理组织学检查，9例(36.0%，9/25)共31枚淋巴结(22.9%，31/135)病理切片中显现出棕黄色的肿瘤细胞。这些细胞多呈单个或直径/长度小于Zmm的细胞团或条索，分布在淋巴结的边缘窦或间质中，为微小转移。在16例H&E染色病理组织学诊断为PN。期的患者中，有5例患者(31.2%，5116)的肺门淋巴结出现了肿瘤细胞的微小转移，解放军总医院军医进修学院博士学位论文而另9例H&E染色病理诊断为PNI期的患者中，有4例(44.4%，4/9)出现了纵隔淋巴结的微小转移。两组间差异有显著性意义(xZ=52.900，P=0.0193)。经Logistie回归多因素分析，肿瘤的大小(直经>3.scm)、分化程度(低分化)和淋巴结分期(Nl期)与淋巴结微转移关系密切。3、本实验中，cK;91nRNAR下PCR的灵敏度为10一”;且阴性对照组中，无一例出现阳性反应。上述对照实验结果表明，Rl’- PCR技术是适合用来检测肿瘤微小转移的。25例非小细胞肺癌患者中，39组区域淋巴结H&E染色病理为阴性，其中，n例患者的n组区域淋巴结混合组织RT-PCR检查呈阳性反应。RT-PCR和IHC两种现代技术在检测淋巴结肿瘤细胞微转移时，结果间存在明显的一致胜(xZ=37.215，P=0.0795)。 结论:1、普通苏木精伊红染色的病理组织学检查能准确地检测出非小细胞肺癌患者淋巴结中的显性转移灶，而对于那些隐匿性微小转移灶，却显得力不从心。2、在I、n期非小细胞肺癌患者中，有部分患者存在病理分期过低的现象，这些患者的TNM分期应该重新进行细分。3、免疫组化染色技术可以大大提高非小细胞肺癌患者淋巴结中肿瘤细胞微小转移的检出率。通过对淋巴结微转移的检测，免疫组化染色技术可对部分I、11期的非小细胞肺癌患者重新进行更加精确的TNM分期。4、逆转录聚合酶链反应技术是一种特异性和敏感性均较高的肿瘤微转移检测方法。该方法在检测非小细胞肺癌患者肿瘤细胞淋巴结的微转移方面，与免疫组化染色法价值相当。由于逆转录聚合酶链反应技术可以大大减少检测淋巴结微转移的工作量，同时还降低了检测的费用，因而具有更加广阔的临床应用前景。S、本实验结果为临床医师对“早期”非小细胞肺癌患者术中进行扩大性淋巴结清扫取样术提供了更加合理的科学依据。解放军总医院军医进修学院博士学位论文与淋巴结出现显性转移的患者相比，由于那些仅有淋巴结微转移的患者对各种辅助治疗会更加敏感，疗效更好，因此，淋巴结微转移的检查对I、11期的非小细胞肺癌?