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目的:我们拟应用MCT 60mg/kg的剂量来研究MCT诱导大鼠PAH发生发展的进程,探究该模型是否符合人类PAH的自然进程,为开展PAH发病机制研究奠定基础。方法:将24只SPF级雄性SD大鼠随机平均分为3组,每组8只,分别为MCT诱导3周的肺动脉高压组(MCT-3wks-PAH组),MCT诱导4周的肺动脉高压组(MCT-4wks-PAH组)和正常对照组(Ctrl组)。MCT-PAH组大鼠给予一次性腹腔注射MCT(60mg/kg)溶液诱导PAH模型,Ctrl组给予等量生理盐水腹腔注射。在第21天和第28天时,检测各组大鼠的以下数据并进行比较:1.生存率;2.体重(Weight)和体重增量(Weight Increment,WI);3.血流动力学:右心室压力(Right ventricular pressure,RVP)和肺动脉压力(Pulmonary arterial pressure,PAP),包括收缩压(Systolic)、舒张压(Diastolic)和平均压(Mean);4.右心室肥厚指数(Right Ventricular Hypertrophy Index,RVHI);5.肺组织HE染色切片,观察肺血管重塑情况。结果:1.MCT-3wks组、MCT-4wks组和Ctrl组大鼠的生存率分别为75%(6/8)、50%(4/8)和100%(8/8),Ctrl组大鼠的生存率显著高于MCT-PAH组(P<0.05)。2.观察期内Ctrl组大鼠的体重持续增长,MCT-PAH组则明显增长缓慢,且从第21天开始降低。第21天时,MCT-3wks组和MCT-4wks组大鼠的 WI 均显著低于 Ctrl 组大鼠的 WI(102.4±13.12,109.8±7.57 vs.172.1±7.70g,P all<0.0001);第 28 天时,MCT-4wks 组的 WI 显著低于 Ctrl 组的 WI(54.38±32.04 vs.216.4±10.54g,P<0.0001),且显著低于自身第 21 天的 WI(54.38±32.04 vs.109.8±7.57g,P<0.0001)。3.与 Ctrl 组大鼠的 PAP 相比,MCT-3wks 组、MCT-4wks 组大鼠的 PAP 显著升高:SPAP(49.15±5.31,39.65±4.59 vs.20.23±2.20 mmHg,P all<0.0001)、DPAP(42.09±7.11,27.37±6.67 vs.15.60±2.58 mmHg,P all<0.0001)和 MPAP(45.97±6.18,33.29±4.35 vs.18.36±2.15 mmHg,P all<0.0001);RVP 也显著升高:SRVP(60.51±7.20,47.37±4.84 vs.29.37±5.32mmHg,P all<0.0001)、DRVP(7.17±2.44,13.22±4.94 vs.3.74±1.90 mmHg,P<0.05,P<0.0001)和 MRVP(32.67±4.59,31.00±4.37 vs.15.84±2.55 mmHg,P all<0.0001)。但是 MCT-4wks 组的 PAP 显著低于 MCT-3wks 组:SPAP(39.65±4.59 vs.49.15±5.31 mmHg,P<0.01)、DPAP(27.37±6.67 vs.42.09±7.11 mmHg,P<0.01)、MPAP(33.29±4.35 vs.45.97±6.18 mmHg,P<0.01)。MCT-4wks 组的SRVP 显著低于 MCT-3wks 组的 SRVP(47.37±4.84 vs.60.51±7.20 mmHg,P<0.01),相反,DRVP 显著高于 MCT-3wks 组(13.22±4.94 vs.7.17±2.44 mmHg,P<0.05),而 MRVP 无显著差异(31.00±4.37 vs.32.67±4.59 mmHg,ns)。4.MCT-3wks组和MCT-4wks组大鼠的RVHI显著高于Ctrl组的RVHI(0.612±0.075,0.731±0.124 vs.0.285±0.036,P all<0.0001);且 MCT-4wks 组的RVHI 显著高于 MCT-3wks 组大鼠的 RVHI(0.731±0.124 vs.0.612±0.075,P<0.05);5.与Ctrl组相比,MCT-PAH组大鼠发生明显的肺血管重塑,且在<100μm的肺血管中,MCT-4wks组的肺血管重塑现象比MCT-3wks组更明显,甚至出现肺血管闭塞。结论:MCT(60mg/kg)溶液一次性腹腔注射构建的大鼠PAH模型与人类PAH的发展进程较为接近,是一种良好的稳定的PAH动物模型,可用于PAH肺血管重塑的机理研究。目的:我们试图通过micro-RNA芯片技术来筛选MCT-PAH组(即MCT-3wks组)大鼠的肺动脉和正常大鼠(即Ctrl组)的肺动脉之间差异表达的miRNA,从而寻找出参与PAH肺血管重塑的关键miRNA,为深入研究PAH肺血管重塑的机制提供新思路,并挖掘PAH预防和治疗的新靶点。方法:利用大鼠全基因组miRNA微阵列对3只MCT-3wks组大鼠和3只Ctrl组大鼠的肺动脉样本进行miRNA表达谱分析,筛选出差异表达的miRNA。并采用RT-qPCR的方法在6只MCT-3wks组大鼠和6只Ctrl组大鼠上验证目的miRNA miR-125a-5p的表达水平。然后,利用生物信息学手段预测miR-125a-5p的靶基因,并对其靶基因进行基因本体(Gene Ontology,GO)功能富集分析。结果:1.MCT-3wks组和Ctrl组大鼠肺动脉中差异表达的miRNAs有79个,其中上调的miRNAs有27个,下调的有52个。2.miR-125a-5p在MCT-3wks组大鼠肺动脉中的表达显著低于Ctrl组(P<0.01)。3.预测到的miR-125a-5p的靶基因有35个,GO富集分析发现它主要参与线粒体功能的调控,而其中起主导作用的靶基因为信号传导和转录激活因子3(Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)。结论:miR-125a-5p有可能通过调控线粒体的功能参与了 PAH的发生发展,具体机制有待进一步研究。目的:探讨miR-125a-5p对PASMCs功能的影响以及具体的调控机制。方法:用RT-qPCR检测miR-125a-5p的组织表达特异性,以及在PASMCs和MCT-PASMCs 中的表达情况。将 miR-125a-5p 的 agomir 和 antagomir 转染到PASMCs中,利用CCK8和AnnexinV/PI检测其增殖和凋亡情况,RT-qPCR检测TGF-β1和IL-6的表达情况以及IL-6/STAT3/Bcl-2全通路的表达情况。用细胞因子TGF-β1和IL-6刺激PASMCs后,用RT-qPCR检测刺激后1天、2天和3天时PASMCs中miR-125a-5p的表达水平。结果:1.miR-125a-5p在血管组织(肺动脉和主动脉)及富含血管组织(大脑和肾脏)中的表达量显著高于其他组织。2.MCT-PASMCs中miR-125a-5p的表达量显著低于 PASMCs(P<0.001)。3.转染 miR-125a-5p agomir 可以抑制 PASMCs的增殖并促进其凋亡,而转染miR-125a-5p antagomir则可促进PASMCs的增殖并抑制其凋亡。4.转染miR-125a-5p的agomir后可抑制PASMCs表达TGF-β1和 IL-6 mRNA;转染 miR-125a-5p 的 antagomir 后可促进 TGF-β1 和 IL-6 mRNA的表达。5.TGF-β1可以显著刺激PASMCs中miR-125a-5p的表达,而IL-6刺激对miR-125a-5p的表达并无明显影响。6.在PASMCs中转染了 miR-125a-5p的agomir可以显著抑制IL-6/STAT3/Bcl-2 mRNA的表达;而转染miR-125a-5p的antagomir则可以显著促进IL-6/STAT3/Bcl-2 mRNA的表达。结论:miR-125a-5p能够抑制PASMCs的增殖并促进其凋亡,可能是通过TGF-β1和IL-6信号通路来调控PASMCs的功能。此外,TGF-β1和miR-125a-5p之间可能存在负反馈调节作用。