紫杉醇联合川穹嗪对Hela细胞的体外作用及机制

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宫颈癌是一种高发病率、高死亡率的恶性肿瘤,严重威胁女性健康。我国宫颈癌的发病率高居世界第二位,是发达国家的6倍,且呈年轻化趋势。我国每年约有15万的新发宫颈癌病例,约占全球患者总数的1/3。与宫颈鳞癌相比,腺癌发病率、死亡率逐渐增加,因对放疗敏感性较差,因此临床上主要以手术、化疗为主要治疗手段。由于患者对治疗后生活质量的要求高,渴望正常的内分泌功能及性生活,化疗越来越受到重视。紫杉醇是宫颈癌的一线化疗药物,对宫颈癌化疗疗效显著,广泛应用于各期宫颈癌患者。紫杉醇通过影响微管解聚使细胞分裂停留在G2和M期,从而杀死癌细胞的一种植物性抗肿瘤药,但其不良作用及耐药性限制其临床疗效,因此研发新抗肿瘤药物对抗现有药物耐药性成为当前宫颈癌研究的重点。川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP,又名天然四甲基吡嗪)是川芎的主要成分,具有扩血管、降血压、抗心肌、脑等器官缺血、活血祛瘀等功能。近年来,大量文献报道川芎嗪具有抑制肿瘤细胞增殖、促进癌细胞凋亡、增强化疗效果﹑逆转多耐药等生物学效应。因此我们初步假设川穹嗪可以作为一种新型抗宫颈癌肿瘤药物,与紫杉醇联合用药时显著增加后者的抗肿瘤效果。通过实验观察紫杉醇(Paclitaxel)及川穹嗪(tetramethylpyrazine)在单独或者联合用药情况下对Hela细胞生长的影响,进而为宫颈癌化疗寻求新的药物、逆转耐药等提供理论依据。我们采用CCK-8染色法检测紫杉醇、川穹嗪单独和联合用药时对宫颈癌Hela细胞生长的影响;流式细胞术Annexin V-PI双染法检测紫杉醇、川穹嗪单独及联合用药时对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响;SP免疫组化法检测紫杉醇、川穹嗪单独及联合作用时对宫颈癌Hela细胞表面PD-L1表达的影响情况;结果显示:紫杉醇、川穹嗪单独作用时可以抑制宫颈癌Hela细胞的增殖。紫杉醇、川穹嗪单独或者联合作用于宫颈癌Hela细胞时,于显微镜下可明显看到宫颈癌Hela细胞形态发生不同程度的变化,紫杉醇组细胞形态变化程度高于川穹嗪组;紫杉醇和川穹嗪联合用药组细胞形态改变程度显著高于前两个单独用药组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。双染法显示:紫杉醇组、川穹嗪组结果说明当两者药物单独使用时均可以促进宫颈癌Hela细胞的凋亡,且紫杉醇组的效果优于川穹嗪;紫杉醇和川穹嗪联合用药组细胞凋亡情况显著高于前两个单独用药组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。SP免疫组化法检测结果揭示:紫杉醇组Hela细胞表面PD-L1的表达量略高于对照组、川穹嗪组Hela细胞表面PD-L1的表达量少于紫杉醇组;紫杉醇和川穹嗪联合用药组细胞表面PD-L1的表达量显著低于前两个单独用药组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。由此我们可以推断:紫杉醇、川穹嗪单独用药时都可以对宫颈癌Hela细胞产生抑制增殖、促进凋亡的作用,说明二者可能都有抗宫颈癌的作用,且紫杉醇的效果优于川穹嗪;紫杉醇与川穹嗪联合作用效果明显优于紫杉醇、川穹嗪单独应用时的效果,因此可以推测两者在抗宫颈癌上具有协同促进作用,川穹嗪可以增强紫杉醇在宫颈癌化疗中的效果;紫杉醇、川穹嗪对宫颈癌Hela细胞的作用机制可能与细胞表面PD-L1的表达有关。
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