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目的：肿瘤可谓威胁人类健康的“头号杀手”，而乳腺癌是女性最常见的肿瘤之一[1]。目前肿瘤的治疗药物多为非选择性，即在杀伤肿瘤细胞同时，亦对正常人体组织器官有明显毒副作用。RP215是鼠抗人单克隆抗体，其抗原CA215特异表达于几乎所有肿瘤组织和细胞表面，且RP215仅特异性结合癌源性IgG，而对正常B细胞分泌的IgG不反应[3]。因此我们设想RP215是最理想的肿瘤抗体药物之一。本实验利用基因工程抗体技术将RP215单克隆抗体改造成为具有与抗原结合能力的小抗体片段，即将其重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）通过一段连接肽，首尾拼接以构建RP215单链抗体，并在乳腺癌中观察其生物活性，为开发治疗乳腺癌的新抗体靶向药物奠定基础。方法：通过RT-PCR从分泌RP215单克隆抗体的杂交瘤细胞株OC-3-VGH中扩增得到重链可变区VH和轻链可变区VL，经重叠延伸PCR将VH和VL基因构建为单链抗体形式，即RP215-scFv基因，经双酶切和DNA测序正确后，将其克隆至pET32a(+)载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。经IPTG诱导后的重组蛋白上清液，用Ni-NTA树脂纯化得到目的蛋白，SDS-PAGE电泳分析其分子量大小及纯度。Western blot，细胞免疫荧光，ELISA和竞争ELISA检测RP215-scFv的乳腺癌细胞中的免疫活性。流式细胞术检测它在乳腺癌细胞的周期分布及其诱导凋亡功能。结果：1.双酶切和DNA测序分析，结果示：RP215-scFv原核表达载体构建成功，命名为pET32a(+)-RP215-scFv。2. SDS-PAGE电泳分析其纯度约为88%，Western blot显示其分子量大小约44KD，符合理论值。3.细胞免疫荧光实验显示：RP215-scFv能识别位于乳癌细胞（MCF7, MB468, MB231, BT549and SK-BR-3）表面的癌性抗原CA215。4. ELISA和竞争ELISA检测示RP215-scFv具有与CA215特异性结合的良好免疫活性。5.流式细胞术表明RP215-scFv能诱导乳癌细胞周期阻滞在G0/G1期，但对诱导其凋亡无统计学意义。结论：本实验成功构建了抗CA215的单链抗体RP215-scFv，它具有较好的免疫活性并能以膜结合的形式精确定位于乳腺癌细胞株，从而为乳腺癌靶向诊断、治疗及抗体药物的研发奠定了基础。