肝细胞生长因子(HGF)是酪氨酸激酶受体c-Met(间充质上皮转化因子),也称为肝细胞生长因子受体,HGFR目前唯一已知的配体,可激活c-Met基因,触发一系列级联信号,调节下游多种信号通路。一旦HGF/c-Met信号通路异常活化,将促进多种肿瘤的发生、发展以及转移。导致正常细胞异常化,从而调节细胞增殖、转移、分化、侵袭、血管生成和抗凋亡。由于c-Met处于信号传导的核心位置,阻断c-Met的表达虽然可以抑制肿瘤的发展和侵袭,但是也会对机体造成严重的不良反应。因此,我们思索从c-Met的上游寻找转录调控c-Met的表达调控因子,达到特异性抑制c-Met异常激活的作用。然而,c-Met转录激活的机制及其在肺癌发生发展中的作用尚不清楚。因此,筛选c-Met的转录因子,研究转录因子如何调控c-Met的活化机制和生物学过程,对肺癌的临床治疗具有重要意义。通过分析c-Met启动子的核心序列,并采用双荧光素酶报告基因检测和染色质免疫共沉淀法(CHIP)对c-Met的转录调控因子进行系统筛查,筛查到Smad1和Smad3能更好地与c-Met的核心序列结合。最后通过肺癌组织和癌旁组织的转录组测序以及western blot检测到肺癌组织中c-Met高表达,Smad3低表达。许多研究已经证明,异常TGF-β/Smad信号参与肿瘤转移,上皮细胞-间充质转化(EMT)和血管生成。而且TGF-β是调节细胞增殖、分化、侵袭、凋亡和免疫反应的关键因素,但他们存在什么样的调控至今没有明确的报道。我们通过成功构建转录因子Smad3过表达和沉默表达的质粒,将构建好的质粒稳转到H1299细胞中,成功筛选到Smad3过表达以及敲减的稳定细胞株,并确定DOX诱导Tetshsmad3的最佳浓度以及最佳时间分别是:500ng/ml、24h。我们分别进行免疫荧光实验以及用HGF以及TGF-β去处理细胞,然后通过western-blot以及q RT-PCR去检测。结果表明在人肺癌H1299细胞中,Smad3转录负调控c-Met的表达和激活,肝细胞生长因子(HGF)呈时间依赖性的促进c-Met蛋白的表达和激活,但不能反馈调节Smad3对c-Met蛋白表达的调控。当抑癌基因Smad3的配体TGF-β的加入促进Smad3介导的负调控c-Met蛋白的表达和激活,并且呈现时间依赖性。为了进一步研究Smad3在肺癌发生中的作用机理,我们通过细胞划痕实验、Transwell实验、单细胞株形成实验、western blot以及q RT-PCR去研究癌变过程相关的EMT转化以及血管生成,其结果发现突变Smad3基因能够导致EMT的转化以及血管因子的表达,用TGF-β处理细胞能够协同突变的Smad3基因调控EMT的转化以及血管生成。本课题从c-Met转录调控因子着手,发现Smad3能够负调控原癌基因c-Met的表达,并且能够阻碍H1299的增值、侵袭以及迁移等能力,并进一步地证实Smad3基因能够抑制血管生成,从而达到抑制肿瘤的生长。为我们在肺癌治疗的过程中提供了新的线索,特别是为治疗c-Met相关的肺癌提供了全新的药物靶点和方法。