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第一部分Ad5-Sema3A重组腺病毒载体的构建目的：1.构建重组腺病毒载体Ad5-Sema3A。2.探讨腺病毒介导的Sema3A基因对大鼠心肌梗死后交感神经重构的影响。3.探讨腺病毒介导的Sema3A基因对大鼠心肌梗死后电重构的影响。方法：1.通过EcoRI和XbaⅠ双酶切Sema3A质粒,得到目的条带。然后再通过EcoRI和NheⅠ双酶切pDC316质粒,得到线性化的载体条带,片断连接,转化,筛选得到重组的pDC316-Sema3A质粒。随后用PCR和酶切的方法对重组pDC316-Sema3A质粒进行鉴定,最后经全自动核酸分析仪上进行序列测定证实连接正确。制备感受态细胞,进行转化,大量制备质粒DNA；然后用双质粒共转染293细胞,产生重组腺病毒Ad5-Sema3A。进行病毒扩增、纯化,计算病毒滴度。2.应用结扎大鼠冠状动脉前降支的方法建立大鼠心肌梗死的模型,将携带Sema3A的腺病毒载体注射到大鼠梗死周边区。术后7天和14天,观察Sema3A在梗死周边区的表达情况；8周后,应用Western blot和RT-PCR技术观察Sema3A对大鼠心肌梗死后梗死周边区生长相关蛋白43(growth-associated protein 43,GAP43)和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)蛋白和基因表达的影响；应用免疫组织化学技术观察Sema3A对大鼠心肌梗死后梗死周边区GAP43和TH密度和分布的的影响。3.应用结扎大鼠冠状动脉前降支的方法建立大鼠心肌梗死的模型,将携带Sema3A的腺病毒载体注射到大鼠梗死周边区。8周后,观察Sema3A对血流动力学、体表心电图和心率变异性的影响；应用单向动作电位技术观察Sema3A对大鼠单向动作电位时程(MAPD)、有效不应期(ERP)和心律失常易感性的影响；应用Western blot和Real-time RT-PCR技术观察Sema3A对大鼠梗死周边区离子通道蛋白和基因表达的影响。结果：1.成功构建载有Sema3A基因的重组pDC316-Sema3A质粒,并用PCR、酶切、序列测定和BLAST的方法进行了鉴定,证明连接正确；获得了携带Sema3A基因的大肠杆菌菌株；成功构建携带Sema3A基因的增殖能力缺陷的新型重组腺病毒Ad5-Sema3A,并进行了扩增和纯化。测得病毒滴度为3.4×1011VP／mL,病毒活性单位(TCID50)为5.2×1010IU／ml。2.术后第七天,可见带有绿色荧光的阳性细胞分布在左心室心肌组织内,分布不均匀,距离注射点越近的心肌细胞阳性率越高。到第14天的时候,带有绿色荧光的阳性细胞在左室心肌组织内分布更加明显,说明携带Sema3A腺病毒载体能够在大鼠梗死周边区稳定的表达。8周后,Sema3A组大鼠心肌组织中的GAP43和TH蛋白和基因表达明显降低,神经纤维与心肌细胞走行大体一致,神经分布更趋于规则化,且神经纤维相对较稀疏、纤细,并且TH／GAP43比值也较心梗组和Ad-GFP组显著减少(P<0.05)。3.心肌梗死8周后,Sema3A改善心梗后不良血流动力学状态,缩短PR间期、QRS间期、QT间期和QTc间期,提升整个心脏的心率变异性,Sema3A明显缩短梗死周边区和非梗死区MAPD20(20±6.0 ms vs 24.0±6.4 ms,P<0.05)、MAPD50(38.5±7.2 ms vs 44.3±7.2 ms,P<0.05)、MAPD90(72.4±9.3ms vs 84.6±10.1 ms,P<0.05)和有效不应期(65.8±8.4 ms vs 80.1±9.6 ms,P<0.05),提高心室颤动阈值(11.0±2.65V vs 7.2±1.30V,P<0.05),上调心肌细胞膜上离子通道蛋白Kv1.4、Kv4.2、KChIP2、Kir2.1和SERCA2a的表达,同时上调Kv4.2、Kv4.3、KChIP2、Kir2.1、SERCA2a和L-Ca2+等离子通道基因的表达水平,使心脏电生理性质趋于稳定,抑制心律失常的发生。结论：1.成功构建携带Sema3A基因具有增殖能力缺陷的新型重组腺病毒Ad5-Sema3A载体。2.携带Sema3A腺病毒载体能够在大鼠梗死周边区稳定的表达,从而起到抑制大鼠心梗后交感神经重构现象。3. Sema3A能够明显改善心肌梗死后的电重构,抑制心律失常的发生。