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目的:亚低温通过多条信号途径参与颅脑创伤后神经元保护作用,而PTEN是一个在脑组织中高度表达的具有促进损伤后神经细胞凋亡作用的抑癌基因,其通过磷酸化作用,调控多种的细胞间信号传导,促进细胞凋亡。两者在调控细胞凋亡过程中有许多共同的作用因子,因此推测亚低温对颅脑创伤后神经细胞凋亡的保护作用可能与影响 PTEN表达有关,本课题通过研究亚低温对颅脑创伤后PTEN表达的影响,阐明亚低温抑制神经元凋亡与PTEN的关系,为亚低温的临床实施提供更多的理论依据。 方法:1.以 SD雄性大鼠为研究对象,采用Marmarou方法制作大鼠颅脑损伤动物模型,随机分为3组:①对照组只麻醉及切开头皮不致伤;②常温 DAI组致伤后,使用保温毯使其体温维持在36～37℃;③亚低温 DAI组致伤后,采用物理降温方法其体温降至32～35℃;2.根据大鼠受伤后生命体征变化及行为判断造模是否成功;3.HE染色检测亚低温对损伤后神经细胞的保护作用;4.RT-PCR及WEstErn blot检测大鼠DAI后神经细胞表达 PTEN的变化,及亚低温对大鼠DAI后神经细胞表达 PTEN的影响。 结果:1.成功复制Marmarou大鼠颅脑损伤动物模型; 2.HE染色表明:对照组脑组织结构完整,神经细胞形态正常;常温创伤组脑组织广泛水肿及神经元变性坏死改变,视野内可见有核溶解及神经元细胞空泡样变,神经元存活数目明显减少,细胞间隙显著增宽;亚低温组脑组织病理改变明显较常温组轻,可见部分神经细胞变性,但深染程度减轻,细胞无缩小,细胞周间隙无明显变化,水肿较常温创伤组轻 3.RT-PCR显示创伤后 PTENmRNA的表达在伤后6小时已经开始增加,24小时达到高峰,72小时后仍高于对照组,亚低温可以明显较降低经创伤后PTENmRNA的表达水平。 4.通过 WEstErn blot检测到创伤后神经细胞中PTEN蛋白的浓度在伤后6小时已经开始增加,24小时达到高峰,72小时后仍高于对照组,亚低温可以明显较降低经创伤后6小时、24小时 PTEN蛋白的表达水平,但对伤后72小时 PTEN蛋白的表达水平,亚低温组和常温组无明显统计差异。 结论:1.Marmarou法复制大鼠颅脑损伤动物早模稳定可靠。 2.颅脑外伤后损伤神经细胞表达 PTEN增多,诱导损伤神经细胞凋亡。 3.亚低温可以降低颅脑损伤后神经细胞 PTEN表达,亚低温治疗脑保护的作用可能通过降低损伤神经细胞 PTEN表达实现。