HCMV感染对HEL细胞细胞周期相关因子Cdt1与Geminin表达的影响

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目的研究人胚肺成纤维(human embryonic lung fibroblastic,HEL)细胞细胞周期相关因子Cdt1与Geminin的表达状态及人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对两者表达的影响,探讨HCMV感染可能的发病机制。方法用血清饥饿法同步化HEL细胞于G0/G1期,流式细胞术检测细胞周期;用HCMV感染同步化的HEL细胞作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。用倒置相差显微镜观察两组细胞形态学变化至感染后168小时。于感染后12h(hour)、24h、48h、72h和96h收获细胞,提取总的RNA,采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)技术检测Cdt1-mRNA和Geminin-mRNA的表达水平。结果1、模拟感染组未见细胞形态学改变,感染组感染后36h即可见局部细胞变圆、膨胀,胞体及胞核巨大化,168h时可见所有细胞均发生病变。2、分别用含O.5%,1%,2%和10%新生牛血清的DMEM培养基培养HEL细胞,48小时后收获细胞,结果显示处于G0/G1期的HEL细胞所占百分数分别为82.8%,78.4%,69.9%,43.8%。新生牛血清浓度为0.5%时,细胞同步化较理想,所同步化的HEL细胞可用于试验。3、12h、24h、48h和72h两组HEL细胞Cdt1-mRNA表达水平均有显著性差异(P<0.05),12h和24h感染组较模拟感染组明显降低,48h和72h时感染组较模拟感染组明显升高。将其制成时间与Cdt1-mRNA表达水平线图显示,模拟感染组在感染后12h时Cdt1-mRNA表达水平最高,感染组在感染后48h达最高峰。4、12h、24h、48h和72h两组HEL细胞Geminin-mRNA表达水平均有显著性差异(P<0.05),12h和24h感染组较模拟感染组明显增加,48h和72h时模拟感染组较感染组明显升高。将其制成时间与Geminin-mRNA表达水平线图显示,感染组在感染后12h时Geminin-mRNA表达水平最高,模拟感染组在感染后48h达最高峰。结论:1、血清饥饿法将绝大部分HEL细胞同步于G0/G1期,0.5%新生牛血清的DMEM培养基饥饿HEL细胞同步化效果较佳。2、HCMV能诱导Cdt1及Geminin因子表达异常,使Geminin/Cdt1平衡失调,这可能是HCMV感染导致细胞周期阻滞于G1期的机制。
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