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在8种人体和动物所需的必需氨基酸中,苏氨酸排在赖氨酸、蛋氨酸、色氨酸之后,占第4重要的位置。苏氨酸正在发挥越来越重要的作用,它被大量地应用于食品、饲料、医疗等方面。L-苏氨酸的发酵生产,主要受L-苏氨酸自身的反馈抑制和天冬氨酸族其它氨基酸的反馈抑制和阻遏。本论文以北京棒杆菌AS1.299为出发菌株经物理和化学的诱变,筛选其抗药物平板突变株,解除天冬氨酸族其它氨基酸的反馈抑制和阻遏,使产L-苏氨酸的关键酶活性提高和大量生成,并增加了前体天冬氨酸的产量,从而使L-苏氨酸产量大幅度提高;进一步对获得的突变菌株进行发酵条件优化,使L-苏氨酸产量提高。研究内容和结果如下:1、通过薄层层析法定性、定量测定发酵液中L-苏氨酸含量的研究得出了以下结论:选定了0.3%的茚三酮为显色剂;层析方法为薄层层析,并且层析液为水:乙醇:冰醋酸=1:6:0.5(体积比),利于苏氨酸与谷氨酸的分离;通过薄层层析后最佳洗脱时间为30min;并用紫外分光光度计测定了最佳的吸收波长为512nm;建立了“薄层层析—紫外分光光度法”定性和定量测定发酵液中L-苏氨酸的量:点样量为1μL,点样直径在5mm内,层析后,在105℃显色5min;然后刮下整个显色的L-苏氨酸斑点,洗脱30min,取出后必须在60min内用紫外分光光度计(波长512nm)测定其吸光度。2、以北京棒杆菌AS 1.299(Corynebacterium pekinense)为出发菌株,经过紫外-亚硝基胍(NTG)诱变,得到L-苏氨酸高产突变株N50-10,其产量为1.150g/L。在菌株N50-10的基础上,又筛选出抗乙硫氨酸和抗磺胺胍突变株SG06-10(Ethr+SGr),其L-苏氨酸产量达到了2.463g/L,比原菌提高了2.419g/L。经5次传代,产量稳定。3、通过响应面法对产L-苏氨酸突变株SG06-10的发酵培养基成分和发酵工艺条件进行优化,得到了最佳发酵培养基配方为:葡萄糖18.70%,尿素1.25%, MgSO4 0.10%, KH2PO4 0.05%, FeSO4·7H2O 0.02%, MnSO4·H2O 0.02%,生物素8μg/100mL,硫胺素200μg/100mL,pH 7.0-7.2;最佳发酵工艺条件为:温度33℃,pH值6.8,接种量8%,装液量61.3mL,转速180r/min,培养时间72h。在此优化条件组合下L-苏氨酸产量为4.910g/L,比初始的发酵条件产L-苏氨酸量(2.463g/L)提高了2.447g/L。