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铁蛋白作为一种重要的体液免疫因子,积极参与了淡水珍珠贝类——池蝶蚌的免疫防御反应。本研究中,通过金黄色葡萄球菌(G+)刺激池蝶蚌后,采用qRT-PCR技术检测了铁蛋白(文中记为HsFer-1和HsFer-2)的表达情况。结果发现:HsFer-1在血细胞、肝胰腺及性腺组织中的表达出现了上调,表达峰值分别是基本水平的1.80倍、2.82倍、7.69倍。而HsFer-2的表达也出现上调,表达峰值分别是基本水平的1.80倍、2.34倍、2.25倍。鳗弧菌(G-)刺激池蝶蚌后,HsFer-1/-2的表达也出现了不同程度的上调。重金属离子Cu2+刺激后,HsFer-1在血细胞、性腺组织中均出现表达峰值,表达量是原始水平的9.37倍和9.61倍,而在肝胰腺组织中,HsFer-1的表达水平无显著性的变化。HsFer-2的表达趋势类似HsFer-1,在血细胞和性腺组织中的表达量是原始水平的3.65倍和12.64倍。当Pb2+刺激后,HsFer-1在肝胰腺和性腺组织中的最高表达量是原始水平的1.76倍和4.16倍;HsFer-2的表达水平是2.61倍和4.02倍。Fe3+刺激后,三种组织中HsFer-1的表达量增加到1.53倍、6.14倍、2.74倍;HsFer-2的表达量增加到3.59倍、4.29倍、10.1倍。人工插核后,HsFer-1/-2在斧足中的表达无显著性变化,而血细胞中表达量下调,分别为0.08倍和0.13倍。性腺组织中,HsFer-1/-2的表达量出现上调,分别达到1.80倍和6.46倍。融合铁蛋白rHsFer-1和rHsFer-2的抑菌实验表明:重组铁蛋白能够抑制细菌的生长,抑菌效果随着蛋白浓度的提高而增强。检测rHsFer-1与Fe3+的螯合实验发现,当rHsFer-1的浓度为6μg/ml时,其螯合活性达为39.35%。铁蛋白能够抑制细菌的生长,然而经过Fe3+螯合后,细菌受抑制程度减弱。本研究中,将RNAi干扰技术应用到淡水珍珠贝中,探究HsFer-1与HsFer-2之间的表达关系。观察结果,一方面表明池蝶蚌血细胞在体外能够稳定存活24h;一方面通过qRT-PCR和Western Blotting两种实验技术证实了HsFer-1与HsFer-2的表达水平间存在一定关系。当HsFer-1被沉默后,其表达水平下调,而HsFer-2的表达水平出现上调。我们推测HsFer两个亚型之间存在功能互补,一个蛋白的表达水平下调,另一个则出现上调。通过免疫荧光定位技术,探究池蝶蚌铁蛋白在肝胰腺细胞中的显微定位,结果发现铁蛋白的两个亚型蛋白均出现在肝胰腺细胞膜表面。本实验中,成功构建PDSred2-N1-Ferritin-1和PEGFP-c1-Ferritin-2真核载体,转染池蝶蚌血细胞,经过荧光显微镜观察发现铁蛋白在血细胞中存在于细胞核中。将真核转染技术应用到淡水珠蚌中,我们发现铁蛋白两个亚型蛋白存在的位置无差异,然而不同细胞中铁蛋白的位置却存在差异。我们推测HsFer两个亚型之间存在相互作用关系,因此其分布位置一致,而在不同细胞中铁蛋白功能的不同又导致了其在分布位置的差异。