背景与目的：大肠癌是国内外常见的恶性肿瘤之一,在消化道肿瘤中，其发病率仅次于胃癌和食管癌而位居恶性肿瘤第3位。早期大肠癌常无临床症状,出现症状就诊时往往已是晚期,若早期发现,多数可通过手术切除,预后良好，因此肿瘤的早发现、早诊断、早治疗是提高患者生存率的关键。目前，大肠癌的筛查方法主要有粪便隐血试验(FOBT)、钡灌肠、电子结肠镜检查等。粪便隐血试验是最常用的方法,但敏感性和特异性较低,假阴性和假阳性过高。结肠镜检查是目前筛查及诊断大肠癌的金标准,但属于有创性且检查费用高,难以作为一线筛查方法。与常规临床大肠癌检测相比，粪便脱落细胞检测法具有高特异性、高灵敏性且无创等显著优点，为诊断大肠癌提供新的方法。为提高粪便中的细胞收集率，简化操作过程，本文旨在探讨改进原有的脱落细胞提取方法，着重介绍了三层筛网一体法及纳米磁珠富集脱落细胞法的原理和操作过程，并对其可行性及诊断效率进行了评估，增加这项技术的临床实用性，能够早日大规模地应用于临床工作。方法：1.三层一体筛网提取脱落细胞作用的评价及其意义随机抽取行结肠镜检查的患者共131例，51例大肠癌患者,43例大肠腺瘤患者,16例溃疡性结肠炎患者，21例健康者。收集每例患者的3份自然便，进行不同的预处理，经改良离心淘洗法、三层一体筛网法提取脱落细胞，HE染色及光镜下观察；并对每例患者进行免疫法粪便隐血试验。2.纳米磁珠富集法提取脱落细胞作用的评价及其意义2.1体外培养大肠癌细胞检测磁珠包被系统的富集效率优选一种纳米磁珠富集体外培养大肠癌细胞HCT116，并多次试验验证找到最大富集细胞效率的最适反应条件。2.2纳米磁珠富集大肠癌患者粪便脱落细胞的验证实验38例行结肠镜检查并经病理证实的大肠癌患者及18例健康对照者，收集每例患者的自然便及清肠便，纳米磁珠富集脱落细胞法提取脱落细胞，HE染色及光镜下观察；并对每例患者进行免疫法粪便隐血试验。结果：1.改良离心淘洗法、三层一体筛网法提取脱落细胞的结果51例大肠癌患者的粪便中，结果显示三层一体筛网法检出恶性细胞35例，阳性率为68.63%（35/51）,改良离心淘洗法检出恶性细胞39例，阳性率为76.47%(39/51)，同组大肠癌患者粪便隐血试验的阳性率为80.39%（41/51）。三种方法的敏感性相比无统计学差异（X~2=1.961,P>0.05），但三层一体筛网提取脱落细胞法与粪便隐血试验互补后，对大肠癌的检测敏感性可达92.16%(47/51)，与单一的三层一体筛网法及单一的粪隐血试验敏感性相比差异均有统计学意义(X~2=8.956，P<0.05；X~2=2.981，P<0.05）。2.纳米磁珠富集法提取脱落细胞作用的评价及其意义2.1体外培养大肠癌细胞检测磁珠包被系统的富集效率综合富集细胞数量及HE染色后阅片情况，最适反应条件为：取100ul大肠癌细胞HCT116悬液（10×105/ml），加入40ul表面包被高糖化合物的纳米磁珠③，37℃水浴中孵育60min，将装有孵育后磁珠-细胞混悬液的离心管与磁铁贴壁反应时间为15min。2.2纳米磁珠富集大肠癌患者粪便脱落细胞的验证实验38例大肠癌患者中，用纳米磁珠富集法在自然粪便中对大肠恶性肿瘤的检出敏感性为65.79%（25/38），异型细胞的阳性检出率与大肠癌组织的部位有关（P<0.05），与Dukes分期及组织分化程度均无关（P>0.05）。在清肠液中对大肠恶性肿瘤的检出敏感性为71.05%（27/38）。18例健康人群组中，脱落细胞检查对大肠恶性肿瘤的特异性为100%。纳米磁珠富集法及三层一体筛网法对大肠癌的检出敏感性与FOBT相比，差异无统计学意义（X~2=3.167，X~2=0.457，P>0.05），但两种方法对大肠癌的检出特异性差异有统计学意义（X~2=6.278，X~2=8.418，P﹤0.05）。从涂片效果看，纳米磁珠富集法收集的细胞均匀分散，背景较干净，仅有极少量粪便渣滓，几乎不影响对细胞的观察。结论：1.本实验在粪便脱落细胞的提取过程中主要有两方面改进：（1）将三层一体筛网法用于提取粪便脱落细胞，简化人工手动提取的过程，可用于大样本的临床应用。（2）首次建立了不依赖抗原-抗体的纳米磁珠富集细胞法，此法具有细胞回收率高、特异性高且涂片背景清晰等优点，具有一定的创新性和临床应用价值。2、三层一体筛网法与纳米磁珠富集细胞法提取粪便脱落细胞，证实了粪便脱落细胞法操作简便、费用低且结果可靠，将其与粪隐血试验（FOBT）互补后大大提高了大肠癌的检出率，有望用于大肠癌的筛查。