硬脂酰—辅酶A脱氢酶基因在食品级乳酸菌中的表达及Cop-odeA基因在转基因3T3细胞中过量表达不饱和脂肪酸

来源 :甘肃农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:xiezhen120
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本论文主要开展了2项试验研究。(1)硬脂酰-辅酶A脱氢酶基因在食品级乳酸菌中的表达。硬脂酰辅酶A脱氢酶1(SCD1)是单不饱和脂肪酸合成的限速酶,SCD的主要功能是催化硬脂酰CoA和软脂酰CoA形成油酰CoA和棕榈油酰CoA。为了实现SCD1编码基因在乳酸乳球菌中的表达,采用PCR技术扩增获得人类scd1的编码序列。Nco I和Xba I双酶切后定向插入到食品级表达载体pNZ8149中,构建表达载体pNZ8149-scd1。电转化乳酸乳球菌NZ3900,经菌落PCR和测序鉴定scd1基因成功插入到乳酸乳球菌中。在乳链菌肽诱导下进行scd1的表达,转化株提取脂肪酸,进行脂肪酸含量的气相色谱分析。结果显示,SCD1转化菌株中的C16:1n-7和C18:1n-7脂肪酸组分比转化pNZ8149的对照组乳酸菌分别提高了92%~169%和53%~127%。本研究以scd1基因为例,尝试并证明了脂肪酸脱氢酶类基因能够在食品级乳酸菌中有效表达。(2)Cop-odeA基因在转基因3T3细胞中的表达。Cop-odeA脱氢酶能够催化油酸脱氢,生成n-6脂肪酸亚油酸。人和哺乳动物细胞体内不能合成n-6脂肪酸,必须从食物中摄取这种必需脂肪酸。应用脂质体转染技术将Cop-odeA基因转入小鼠3T3细胞内。结果显示,转基因细胞系的C18:2n-6脂肪酸含量显著提高,底物为10μM和30μM的亚油酸含量分别提高了316%~680%(P<0.01)和47%~60%(P <0.05)。而分别添加30μM C18:2n-6和C18:1n-9+C18:2n-6的底物时,与对照组相比转基因细胞系的C18:3n-3含量没有显著变化(P>0.05)。同时发现EPA含量显著升高164%~304%(P <0.05)。推测Cop-odeA脱氢酶具有双功能Δ-12/ω-3脱氢酶活性。本研究用担子菌属的脂肪酸脱氢酶Cop-odeA在哺乳动物细胞3T3细胞中表达,获得转基因细胞系,为脂肪酸脱氢酶功能的研究,以及与多不饱和脂肪酸相关的疾病研究提供了基础资料。
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