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目的:检测长非编码RNA在食管鳞状细胞癌及其对应癌旁组织的表达差异,并初步探究lncRNA在食管鳞状细胞癌中的作用机制。方法:1.筛选目的lncRNA:收集3对未放化疗、手术切除并经病理HE染色证明的食管鳞状细胞癌组织、对应癌旁组织、癌转移阳性淋巴结组织进行lncRNA芯片筛查。收集配对食管鳞状细胞癌组织、癌旁组织、癌转移阳性淋巴结,trizol法提取组织总RNA并逆转录为cDNA。根据芯片结果,采用qRT-PCR法在食管鳞癌及癌旁组织中检测lncRNA的表达情况以此来筛选目的lncRNA。根据目的lncRNA G077640表达情况对所收集样本患者临床信息进行统计分析。2.检测lncRNA G077640对食管鳞状细胞癌细胞株功能的影响:首先应用qRT-PCR法检测lncRNA G077640在永生化的食管鳞状上皮细胞株(Het-1A)、食管鳞状细胞癌细胞株(TE-1、TE-10、TE-11、KYSE140、KYSE150、EC109、EC9706)中的表达。以高表达lncRNA G077640的食管鳞状细胞癌细胞株TE-11、KYSE150为细胞模型,利用siRNA干扰技术分别干扰TE-11、KYSE150细胞株中lncRNA G077640的表达,检测敲低lncRNA G077640对细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移能力等的影响;构建稳定干扰lncRNA G077640细胞株,进行裸鼠成瘤实验检测瘤体体积及免疫组化实验检测Ki67验证体外实验结果。3.初步探究lncRNA G077640促进食管鳞状细胞癌的机制:利用荧光原位杂交实验明确lncRNA G077640在细胞内的定位;利用末端快速扩增实验获得lncRNA G077640基因末端序列,获取基因全长;利用RNA pull down技术、SDS-PAGE、质谱分析等方法检测lncRNA G077640可能结合的目标蛋白;全基因组表达谱芯片测定敲低lncRNA G077640后下游靶基因的改变,并用qRT-PCR法进行验证。结果:1.lncRNA芯片结果提示有374条lncRNA在癌组织中相较于癌旁组织升高,有476条lncRNA在癌组织中相较于癌旁组织降低。筛选出目标lncRNA G077640,并在大量配对癌与癌旁样本(n=64)中证实lncRNA G077640在食管鳞癌中升高(P<0.05)。LncRNA G077640在患者年龄、性别、肿瘤大小、分级、分期、是否发生淋巴结转移等方面表达差异无统计学意义(P>0.05)。2.lncRNA G077640在食管鳞状细胞癌细胞株(TE-1、TE-10、TE-11、KYSE140、KYSE150、EC109、EC9706)中的表达均高于永生化食管鳞状上皮细胞株(Het-1A)(P值均<0.05)。干扰lncRNA G077640可以抑制食管鳞状细胞癌TE-11、KYSE150的生长增殖、导致细胞周期阻滞,可促进细胞凋亡,并削弱其迁移能力。稳定干扰lncRNA G077640的KYSE150细胞株裸鼠成瘤瘤体较对照组生长缓慢,增殖指标表达减弱。3.荧光原位杂交实验证实lncRNA G077640绝大部分定位于细胞核;末端快速扩增实验获取了lncRNA G077640全长序列,设计合成探针后进行lncRNA G077640 pulldown、SDS-PAGE、质谱分析等实验证实lncRNA G077640可能与蛋白质H2AX相互结合;干扰lncRNA G077640后全基因表达谱芯片及qRT-PCR实验显示参与增殖、凋亡、迁移相关基因表达下调,GO分析显示干扰lncRNA G077640后主要影响参与代谢过程基因表达。结论:LncRNA G077640在食管鳞状细胞癌组织中表达上调,但在患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、分级、分期、是否转移方面差异无统计学意义。LncRNA G077640在食管鳞状细胞癌细胞株中表达上调,并能促进癌细胞生长增殖、迁移、加快细胞周期,抑制细胞凋亡。LncRNA G077640可能通过与H2AX蛋白相互作用导致代谢重编程,从而影响下游增殖、凋亡等相关基因,导致细胞生物学行为的改变,进而促进肿瘤发生发展。