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人甲状旁腺激素（human Parathyroid Hormone, hPTH）是由人甲状旁腺主细胞分泌的一种单链多肽激素,由84个氨基酸组成,是人体内调节骨代谢的重要激素之一,其类似物已被开发成为治疗骨质疏松症的一系列新型药物。研究表明,hPTH前34位氨基酸片段hPTH（1-34）保留了天然hPTH几乎所有可测的生物活性;小分子蛋白与人血清白蛋白（Human Serum Albumin, HSA）融合可以显著延长自身的半衰期。为了提高hPTH生物活性,延长其在人体内的半衰期,我们先将hPTH的前34个氨基酸片段的基因串联,之后再与HSA基因融合,合成了二联体融合蛋白hPTH（1-34）ab-HSA的基因,将融合基因在毕赤酵母中进行表达,并对得到的融合蛋白进行鉴定、纯化和活性初步评价。设计特异性引物,得到两个带有不同5′末端和3′末端延长序列的hPTH（1-34）单体基因片段,重叠PCR技术将二者拼接成二联体,并插入到克隆载体pTG19-T中,构建重组质粒pTG19-T-hPTH（1-34）ab,进行测序。结果显示,克隆得到的二联体基因片段与理论序列完全一致。重叠PCR技术体外拼接hPTH（1-34）ab和HSA基因,得到融合蛋白hPTH（1-34）ab-HSA的基因,将其在EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点插入到表达载体pPIC9K中,构建重组表达质粒pPIC9K-hPTH（1-34）ab-HSA。双酶切鉴定结果表明融合基因已经成功地插入到表达载体pPIC9K中;测序结果表明重叠PCR拼接得到的融合基因序列与预期一致。重组表达质粒pPIC9K-hPTH（1-34）ab-HSA经SalⅠ线性化后电击转化毕赤酵母GS115,利用G418抗性和诱导表达分析筛选出高产重组菌,利用Western blotting鉴定表达产物,之后进行表达条件的初步优化。结果表明,经G418筛选得到能耐受2 mg/mL G418的重组菌五株,进一步的诱导表达筛选得到表达量较高的重组菌两株;Western blotting显示,表达的融合蛋白hPTH（1-34）ab-HSA具有很好的HSA和hPTH抗原性;表达条件优化后发酵液中融合蛋白的表达量达122.8 mg/L。制备融合蛋白hPTH（1-34）ab-HSA电泳纯样品,通过检测它对UAMS32pB细胞株中RANKL、OPG和IGF-1基因mRNA表达的影响初步评价生物活性。结果表明,经超滤浓缩、亲和层析等步骤分离后,得到了电泳纯的融合蛋白;融合蛋白hPTH（1-34）ab-HSA成骨活性良好,且优于融合蛋白hPTH（1-84）-HSA。